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無需負染直接觀察,！科學家用臺式透射電子顯微鏡揭示周圍神經(jīng)丶病變真相,！
臺式小型化設(shè)計
25 KV低電壓設(shè)計
無需任何負染
真實展現(xiàn)生物樣品形貌
TEM、SEM,、STEM三種模式自由切換
......
圖1. 低電壓臺式透射電子顯微鏡LVEM25
周圍神經(jīng)丶?。≒N）是指周圍運動、感覺和自主神經(jīng)的功能障礙和結(jié)構(gòu)改變所致的一組疾病,，嚴重干擾著患者的日?；顒雍蜕钯|(zhì)量。采用PN動物模型來研究PN的發(fā)病機制與治療方法是一種較好的科研手段,，而周圍神經(jīng)丶病一直缺乏能夠充分表征長度相關(guān)性神經(jīng)損傷的動物模型,。
有鑒于此，近日意大利米蘭神經(jīng)科學中心的Guido Cavaletti與Paola Alberti團隊使用神經(jīng)傳導研究與電子顯微鏡觀察相結(jié)合的模式研究了軸突周圍神經(jīng)丶病變動物模型中大鼠腹尾神經(jīng)的形態(tài)功能特征,，文章以Morpho-Functional Characterization of the Rat Ventral Caudal Nerve in a Model of Axonal Peripheral Neuropathy為題發(fā)表在MDPI期刊中。
LVEM25低電壓臺式透射電子顯微鏡觀察離體尾神經(jīng)的成像結(jié)果顯示,，在PN動物神經(jīng)的最近端部分（下圖A）,，大多數(shù)神經(jīng)纖維仍顯示正常外觀，而在神經(jīng)中部（下圖B）,，變性軸突清晰可見,。在神經(jīng)的最遠端部分（下圖C），PN動物表現(xiàn)出嚴重的軸突損失,，以及軸突病變的一些殘留跡象,，這與我們之前基于長期 PTX化療的PN模型的研究結(jié)果一致，我們觀察到細胞從神經(jīng)內(nèi)膜血管遷移到神經(jīng)內(nèi)膜,，這些細胞很可能成為浸潤性巨噬細胞 （下圖D）,。
圖2. 在周圍神經(jīng)丶病變 (PN) 組中觀察到的神經(jīng)長度依賴性損傷的代表性圖像。
(A)：尾巴根部的圖像,。 (B)：尾巴中部的圖像,。 (C)：尾尖處的圖像。
(D)：單核細胞離開血管區(qū)室,，成為遠端部分之一的組織巨噬細胞,。
該研究中，研究人員使用透射電子顯微鏡對大鼠腹尾神經(jīng)軸突進行形態(tài)學觀察來評估神經(jīng)損傷程度,。在傳統(tǒng)神經(jīng)生物樣品研究中,，透射電子顯微鏡需要對切片進行負染,，負染過程本身可能對生物樣品造成損傷；且對不同的神經(jīng)生物樣品,，染料的種類,、濃度、負染時間均需要進行預(yù)實驗來進行探索,，造成了整個實驗流程的復雜化,。在本研究中，研究者使用的LVEM25低電壓臺式透射電子顯微鏡無需負染,，可直接對神經(jīng)樣品進行觀察,，更加真實地展現(xiàn)了神經(jīng)樣品的形貌特征。 LVEM25低電壓臺式透射電子顯微鏡采用25kV低加速電壓設(shè)計,，對生物樣品不會造成任何損傷,，無需負染，也無需復雜的冷卻,、真空系統(tǒng),，且小型臺式設(shè)計可以放置在任意實驗室內(nèi)，擺脫了傳統(tǒng)透射電鏡的成像難題,，提高了樣品成像的襯度/反差（見上圖）,。
數(shù)據(jù)展示：
PTX處理前對全部的大鼠進行全尾長度的NCS檢測以確定檢測基線，C0為鼠尾根部,，C1為距離鼠尾根部1 cm處,，C2為距離鼠尾根部3 cm處，以此類推,。所得結(jié)果如下：
圖3. NCS檢測基線
化療處理結(jié)束時,，從尾部基部開始進行NCS檢測，在PN動物中記錄C0后立即觀察到以SNAP 振幅顯著降低為代表,，與軸突損傷相一致的數(shù)據(jù)變化,。當我們從近端到遠端進行連續(xù)記錄時，觀察到神經(jīng)損傷的嚴重程度隨長度而增加,。損傷嚴重程度逐漸向遠端增加,，直至所有PN動物中在 C8 均未記錄到任何數(shù)據(jù)。（見下圖左）,。通過觀察 CTRL 動物尾部的解剖結(jié)構(gòu)可以發(fā)現(xiàn),， PN組表現(xiàn)出相同的特性，對側(cè)尾靜脈的仔細檢查沒有發(fā)現(xiàn)對靜脈給藥有任何局部反應(yīng),，證實 PN 動物的軸突病變不是由局灶性神經(jīng)損傷引起的,，而可能是由重復靜脈給藥導致的神經(jīng)毒性藥物的全身神經(jīng)毒性作用（見下圖右上）。從尾部中部開始從近到遠,，可以看到明顯的軸突損傷和軸突損失以及退化的神經(jīng)纖維,。在神經(jīng)的最遠端部分,，軸突變性非常嚴重，以至于只可見變性纖維的殘余物,，這與 NCS 實驗可記錄數(shù)據(jù)的缺失現(xiàn)象相匹配（見下圖右下）,。
圖4. NCS檢測數(shù)據(jù)及顯微圖像
結(jié)論：
綜上所述，通過廣泛的形態(tài)學表征證實,，尾神經(jīng)的神經(jīng)生理學研究是評估軸突動物模型的可靠技術(shù),。當預(yù)期（或觀察到的）實驗結(jié)果與損傷嚴重性密切相關(guān)時更應(yīng)考慮使用鼠尾檢測神經(jīng)損傷嚴重程度。因此,，在未來的研究中,，為尾中部可能被認為是檢測軸突損傷的理想部位，軸突損傷的嚴重程度適當,，既不像尾尖那么嚴重,，也不像尾部基部那么輕微。
LVEM25技術(shù)特點：
高襯度：低能量電子對有機分子產(chǎn)生更強烈的散射,，具有更高對比度,。
無需染色：突破以往生物/輕材料成像需要重金屬染色的局限性。
高分辨率：無染色條件下能夠達到1.0 nm的圖像分辨率,。
多模式：LVEM25能夠在TEM,、STEM模式中自由切換。
高效方便：真空準備只需要3分鐘,，空間小,，環(huán)境需求低。
易操作且成本低：友好智能化操作界面,，低耗材,，低維護費用,，無需專業(yè)操作人員,。
LVEM25成像實例：
圖5. LVEM25成像實例 A：腺相關(guān)病毒 B：擬菌病毒 C：脂質(zhì)體 D：成纖維細胞與細菌
圖6. 有機納米顆粒成像 左：80kV條件下成像 右：LVEM25成像
相關(guān)產(chǎn)品：
1、低電壓臺式透射電子顯微鏡-LVEM5
2,、小型低電壓透射電子顯微鏡-LVEM25
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