含量測(cè)定的定量分析法大類上主要包括：色譜分析法,光譜分析法,，定量分析法,。

一、色譜分析法

色譜分析法是一種分離分析方法,，系根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異,，將組分從混合物中分離后再選擇性對(duì)待測(cè)組分進(jìn)行分析的方法。因此色譜分析法是分析混合物的最有力的手段,。

1. 高效液相色譜法（HPLC）

 HPLC全稱是High Performance Liquid Chromatography（高效液相色譜法）,，又稱“高壓液相色譜”,、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”,、“近代柱色譜”等,。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相,，采用高壓輸液系統(tǒng),，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,，在柱內(nèi)各成分被分離后,，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析,。世界上約有80%的有機(jī)化合物可以用HPLC來分析測(cè)定,。HPLC檢測(cè)方法，因?qū)斜姸喑煞值膹?fù)雜體系具有強(qiáng)大的分離功能,，且分析速度快,，其重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度優(yōu)于薄層色譜法。是中藥及其制劑含量測(cè)定的shou選方法,，中國(guó)藥典大多采用 HPLC 進(jìn)行含量測(cè)定,。

 1.1 高效液相色譜分析的流程

由泵將儲(chǔ)液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出,，經(jīng)流量與壓力測(cè)量之后,，導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測(cè)物由進(jìn)樣器注入,，并隨流動(dòng)相通過色譜柱,，在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測(cè)器，檢測(cè)信號(hào)由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理,，并記錄色譜圖,。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫,。這和氣相色譜的程序升溫類似,，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動(dòng)相極性,，使樣品各組分在最佳條件下得以分離,。

    1.2 高效液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程,。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù),、親和力,、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離,。

開始樣品加在柱頭上,，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A,、B和C,，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配,。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留,，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C 在固定相上滯留時(shí)間長(zhǎng),，較晚流出色譜柱,。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間,，第二個(gè)流出色譜柱,。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱,，達(dá)到分離之目的,。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù),、吸附能力,、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題,，也是分離的首要條件,。其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí),，譜帶隨柱長(zhǎng)展寬,，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小,、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān),。所以分離最終效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

1.3 高效液相色譜含量計(jì)算

一般分面積歸一法,，外標(biāo)法,，內(nèi)標(biāo)法，植物提取物用前兩個(gè)比較多,。

面積歸一化法：假定樣品中的所有組分全部流出而且檢測(cè)器對(duì)它們都產(chǎn)生信號(hào),，計(jì)算各雜質(zhì)峰面積以及總和。該方法操作簡(jiǎn)單,，不用標(biāo)準(zhǔn)品,，結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，但是校正因子確定繁瑣和重復(fù)性不好,。國(guó)內(nèi)植物提取物廠家很多為用的是這種檢測(cè)方法,。

外標(biāo)法：要用標(biāo)準(zhǔn)品,，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，但是受標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和線性范圍影響,。標(biāo)準(zhǔn)品分國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口的,，有時(shí)客戶會(huì)zhi定進(jìn)口的標(biāo)品，價(jià)格比較昂貴,。

內(nèi)標(biāo)法： 色譜分析中一種比較準(zhǔn)確的定量方法,，尤其在沒有標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照時(shí)，此方法更顯其*性,。內(nèi)標(biāo)法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物(參見內(nèi)標(biāo)物條)加到一定量的被分析樣品混合物中,，然后對(duì)含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析，分別測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積(或峰高)及相對(duì)校正因子,，按公式和方法即可求出被測(cè)組分在樣品中的百分含量,。檢測(cè)結(jié)果很準(zhǔn)確但是內(nèi)標(biāo)物選擇困難。植物提取物一般不用,。

2. 薄層色譜分析法（TLC）

薄層色譜分析法是將適宜的固定相涂布于玻璃板,、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層,。待點(diǎn)樣,、展開后，根據(jù)比移值(Rf)與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖的比移值(Rf)作對(duì)比,，用以進(jìn)行藥品的鑒別,、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。

薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,，又稱薄層層析,，屬于固－液吸附色譜。它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn),。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克,，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時(shí),，把吸附層加厚,，將樣品點(diǎn)成一條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品,。因此又可用來精制樣品,。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí),，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。

3. 氣相色譜法（GC）

GC：Gas Chromatography 氣相色譜法用氣體作為移動(dòng)相的色譜法。用氣體為流動(dòng)相流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法,，一般用于測(cè)揮發(fā)物質(zhì)的含量,，比如農(nóng)藥殘留 666，DDT 的檢測(cè)用的就是這種方法,。

根據(jù)所用固定相的不同可分為兩類：固定相是固體的，稱為氣固色譜法,；固定相是液體的則稱為氣液色譜法,。

氣相色譜系統(tǒng)由盛在管柱內(nèi)的吸附劑，或惰性固體上涂著液體的固定相和不斷通過管柱的氣體的流動(dòng)相組成,。將欲分離,、分析的樣品從管柱一端加入后，由于固定相對(duì)樣品中各組分吸附或溶解能力不同,，即各組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)有差別,，當(dāng)組分在兩相中反復(fù)多次進(jìn)行分配并隨移動(dòng)相向前移動(dòng)時(shí)，各組分沿管柱運(yùn)動(dòng)的速度就不同,，分配系數(shù)小的組分被固定相滯留的時(shí)間短,，能較快地從色譜柱末端流出。以各組分從柱末端流出的濃度 c對(duì)進(jìn)樣后的時(shí)間t作圖,，得到的圖稱為色譜圖,。

二、光譜分析法

當(dāng)物質(zhì)吸收輻射能或者熱能后,，其內(nèi)部發(fā)生能級(jí)躍遷,，記錄由能級(jí)躍遷所產(chǎn)生的輻射能隨波長(zhǎng)的變化所得到的圖譜成為光譜。利用物質(zhì)光譜進(jìn)行定性,，定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱為光譜分析法,。

1. 紫外吸收光譜分析法（UV）

UV檢測(cè)法也是植物提取物常用的檢測(cè)方法之一，UV全稱紫外-可見分光光度法,，是 Ultraviolet and visiblespectrophotometry 的縮寫,，是基于物質(zhì)分子對(duì)紫外光區(qū)(波長(zhǎng)200~400nm)和可見光區(qū)(波長(zhǎng)為 400~760nm)的單色光輻射的吸收特性建立的色譜分析方法。UV檢測(cè)也稱紫外檢測(cè)法,、紫外光譜檢測(cè)法,。 UV檢測(cè)法主要用于配合物組成及其穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定。紫外光譜是分子中某些價(jià)電子吸收了一定波長(zhǎng)的電磁波,由低能級(jí)躍近到高能級(jí)而產(chǎn)生的一種光譜,，當(dāng)分子中的電子吸收能量后會(huì)從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),，然后放出能量（輻射出特征譜線），回到基態(tài),；而輻射出特征普線的波長(zhǎng)在紫外區(qū)中就叫做紫外光譜（UV）,。

1.1 UV定性分析

在有機(jī)化合物的定性分析中，紫外－可見光譜適用于不飽和有機(jī)化合物，尤其是共軛體系的鑒定,，以此推斷未知物的骨架結(jié)構(gòu),。此外，可配合紅外光譜,、核磁共振波譜法和質(zhì)譜法進(jìn)行定性鑒定和結(jié)構(gòu)分析,，因此它仍不失為是一種有用的輔助方法。一般有兩種定性分析方法,，比較吸收光譜曲線和用經(jīng)驗(yàn)規(guī)則計(jì)算最大吸收波長(zhǎng)λmax,，然后與實(shí)測(cè)值進(jìn)行比較。 結(jié)構(gòu)分析可用來確定化合物的構(gòu)型和構(gòu)象,。如辨別順反異構(gòu)體和互變異構(gòu)體,。

1.2 UV定量分析

紫外－可見分光光度定量分析的依據(jù)是Lambert-Beer定律，即在一定波長(zhǎng)處被測(cè)定物質(zhì)的吸光度與它的溶度呈線性關(guān)系,。應(yīng)此,，通過測(cè)定溶液對(duì)一定波長(zhǎng)入射光的吸光度可求出該物質(zhì)在溶液中的濃度和含量。常用的測(cè)定方法有：?jiǎn)谓M分定量法,、多組分定量法,、雙波長(zhǎng)法、示差分光光度法和導(dǎo)數(shù)光譜法等,。

1. 原子吸收光譜法（AAS）

原子吸收光譜法（AAS）,，全稱是Atomic Absorption Spectrometry。是基于氣態(tài)的基態(tài)原子外層電子對(duì)紫外光和可見光范圍的相對(duì)應(yīng)原子共振輻射線的吸收強(qiáng)度來定量被測(cè)元素含量為基礎(chǔ)的分析方法,，是一種測(cè)量特定氣態(tài)原子對(duì)光輻射的吸收的方法,。

AAS基本原理是，每一種元素的原子不僅可以發(fā)射一系列特征譜線,，也可以吸收與發(fā)射線波長(zhǎng)相同的特征譜線,。當(dāng)光源發(fā)射的某一特征波長(zhǎng)的光通過原子蒸氣時(shí)，即入射輻射的頻率等于原子中的電子由基態(tài)躍遷到較高能態(tài)（一般情況下都是第一激發(fā)態(tài)）所需要的能量頻率時(shí),，原子中的外層電子將選擇性地吸收其同種元素所發(fā)射的特征譜線,，使入射光減弱。

由于原子能級(jí)是量子化的,，因此,，在所有的情況下，原子對(duì)輻射的吸收都是有選擇性的,。由于各元素的原子結(jié)構(gòu)和外層電子的排布不同,，元素從基態(tài)躍遷至第一激發(fā)態(tài)時(shí)吸收的能量不同，因而各元素的共振吸收線具有不同的特征,。原子吸收光譜位于光譜的紫外區(qū)和可見區(qū),。

三,、定量分析法

定量分析法也稱滴定法，是將已知濃度的滴定液(標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液)由滴定管滴加到被測(cè)溶液中,，直至滴定液與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)完wan全(通過適當(dāng)方法指示),，然后根據(jù)滴定液的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系計(jì)算出被測(cè)物質(zhì)的含量,。

四：目前植物提取物常見五種檢測(cè)方法的應(yīng)用領(lǐng)域