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6步教你動物細胞如何培養(yǎng),?

來源:武漢尚恩生物技術有限公司   2022年09月16日 10:11  

細胞培養(yǎng)技術已經成為當今生命科學各領域的基礎技術和基本技能,它也是細胞工程,、基因工程和生物醫(yī)學工程的重要研究手段,。那我們在實際的動物細胞培養(yǎng)實驗中需要注意哪些基本要求呢?


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實驗前準備
實驗前必須分門別類地制訂操作卡片,,如清洗卡,、消毒卡、細胞常用液(細胞培養(yǎng)液,、BSS液,、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡,、細胞原代和傳代操作卡等,。各卡片上注明實驗所需器材的名稱、規(guī)格,、數量,、操作要領和實驗注意事項等。實驗前應按卡片收集,、清點所需用品,,一并放入超凈臺內,,這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同時,,根據每個實驗的要求,,準備好瓶管支架器械消毒盒等。實驗器材準數要大于實驗使用數,,瓶蓋數要大于瓶數,。這樣才能有條不紊地做實驗,也減少了忙亂操作所引起的污染,。
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無菌室和操作室消毒
無菌室內每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1~2次,。實驗前,將實驗器材放入超凈臺內,,打開超凈臺紫外線燈,,同時啟動超凈臺風機,40 min后消毒完畢,,關閉紫外線燈,。這樣,超凈臺內空氣被凈化,,超凈臺面構成相對無菌的環(huán)境,。
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無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及,,器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口),。

②減少手與器材的接觸面,學會手指操作,。

③一切操作,,如打開或封閉瓶口,安裝吸管,、注射器等,,都要在火焰前方進行。瓶口,、吸管,、注射器使用前要經過火焰消毒后使用。

④瓶口順風斜放在支架上,。試劑用后立即封閉瓶口,。瓶口長時間敞開會增加落菌的機會。

⑤不同的細胞同時操作時,,要專管專用,,并要勤換吸管,防止擴大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶內,。液滴用干酒精棉球擦拭,,瓶口再經火焰消毒。

⑦操作者動作要準確敏捷,,盡量避免空氣流動,。

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實驗中操作要求

洗手、著裝與外科臨床要求相同,。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中,,并用75%的酒精擦拭。細胞培養(yǎng)用液從冰箱取出,,試劑瓶口和外壁經灑精外布擦洗后人超凈臺,,超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理,,污染廢液缸,、酒精棉球缸在右側位,,酒精燈在中央位,,試劑瓶在左側位。拆除大包裝,,點燃灑精燈(95%灑精),、火焰無色或微黃色表示酒精雜質少,酒精燃燒*(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精,,這類酒精燃燒時產生的化學物質易附著到吸管或其他瓶,、皿上,帶入培養(yǎng)液中會傷害細胞),。


浸泡75%酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出,,經無菌干紗布擦拭后,迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時間),,冷卻后使用,,避免燙傷細胞。細胞培養(yǎng)液,、牛血清,、酶液的吸管,使用后不能再用火焰消毒,,因為吸管中殘留的培養(yǎng)液被燒焦碳化,,再使用時,會把有害碳化物帶入培養(yǎng)液中毒害細胞,。操作中手指被污染時,,可用酒精紗布或棉球擦拭。在實驗過程中,不要面向操作臺講話或咳嗽,,避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內,,污染空氣。實驗者離開超凈臺時,,立即用肘關節(jié)關閉側窗口,,避免無菌室內細菌隨空氣流入凈化操作區(qū)。

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實驗后要求
實驗完畢,,關閉超凈臺風機和電源,,未使用過的器材放入飯盒內,用過的玻璃器材投入清水中浸泡,,包裝紙疊卷,,繩成束分類歸人,最后,,超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭,,紫外線消毒。
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注意事項

無菌操作離不開火和酒精,,操作中避免事故發(fā)生,。要用打火機點火?;鸩顸c火時,,火星熄滅后投入廢缸內(缸內有廢酒精棉球)。酒精濺出臺面或瓶外壁時,,立即擦干,;一旦發(fā)生著火事故,立即關閉超凈臺風機,,用飯盒,、濕布撲滅火焰。



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