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動(dòng)物細(xì)胞分離培養(yǎng)準(zhǔn)備工作

來(lái)源:武漢尚恩生物技術(shù)有限公司   2022年08月19日 10:13  

動(dòng)物細(xì)胞分離培養(yǎng)是用無(wú)菌操作的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織(或器官)取出,模擬動(dòng)物體內(nèi)的生理?xiàng)l件,,在體外進(jìn)行培養(yǎng),,人們借以觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和細(xì)胞分化以及細(xì)胞凋亡或死亡的過(guò)程,。因?yàn)榉蛛x的細(xì)胞沒(méi)有免疫防御系統(tǒng),,所以動(dòng)物細(xì)胞分離操作需要比外科手術(shù)更加嚴(yán)格的無(wú)菌操作,無(wú)菌操作的原則就是保證細(xì)胞分離過(guò)程中的操作環(huán)境,,使用的器械,、耗材以及試劑無(wú)菌。


硬/件/準(zhǔn)/備




01

儀器:超凈工作臺(tái),、離心機(jī),、倒置顯微鏡,、培養(yǎng)箱、冰箱,、高壓蒸汽消毒裝置,、移液器。

02

器械:止血鉗,、手術(shù)刀,、眼科剪、手術(shù)剪,、鑷子,、細(xì)胞過(guò)濾篩等,。所有器械清洗完以后,使用棉布包裹,,捆好后濕熱滅菌,。

03

耗材:培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶,、離心管(15 mL和50 mL),、巴氏吸管(或玻璃吸管)、移液管,、燒杯,。如果購(gòu)買的是無(wú)菌包裝的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材質(zhì)的用品,,建議使用高壓蒸汽滅菌,。

04

試劑:75%的酒精和碘酒、0.9%的生理鹽水,、DBSS,、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液體培養(yǎng)基,、抗血凝劑,、血清、二甲基亞砜(DMSO),。所使用的液體溶劑大部分使用過(guò)濾除菌的方式保證無(wú)菌,。培養(yǎng)基在使用前先在37℃水浴中升溫。酶儲(chǔ)液放置于-20 ℃,,稀釋以后放在4℃中保存,,因胰蛋白酶在37℃中降解比較快,所以不建議酶升溫至37℃再使用,,可以直接從4℃中取出用完后盡快放回冰箱,。因?yàn)閯?dòng)物組織比較珍貴,建議試劑在使用前先測(cè)試是否染菌,。

05

其他:冰塊,、脫脂棉球、封口膜,、記號(hào)筆,。




實(shí)/驗(yàn)/室/的/清/潔

實(shí)驗(yàn)室一般采用照射或者熏蒸的方法消毒。熏蒸常使用過(guò)氧乙酸蒸氣進(jìn)行熏蒸,,再通過(guò)使用紫外照射的方法滅菌,。實(shí)驗(yàn)室在使用前半個(gè)小時(shí)打開(kāi)紫外燈照射,雖然照射也可以對(duì)操作桌面滅菌,,但因?yàn)樽贤饩€容易被桌面上放置的物品擋住,,導(dǎo)致桌面的滅菌受到影響,,所以如有需要可以在使用前先用自來(lái)水拖地、擦桌子,、超凈工作臺(tái)等,,然后用3%來(lái)蘇爾或0.1%新潔爾滅或0.5%過(guò)氧乙酸擦拭。紫外照射的時(shí)候也可以預(yù)先將實(shí)驗(yàn)中用到的物品放到實(shí)驗(yàn)臺(tái)的邊緣,,進(jìn)一步降低實(shí)驗(yàn)中可能存在的污染風(fēng)險(xiǎn),,照射前檢查實(shí)驗(yàn)中所需要的物品是否已經(jīng)準(zhǔn)備妥當(dāng)(如檢查酒精燈中的酒精量是否可以保證實(shí)驗(yàn)的完成),避免實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中因?yàn)槿鄙僭噭┗蚱餍刀鴮?dǎo)致實(shí)驗(yàn)被迫終止,。


實(shí)驗(yàn)人員無(wú)菌操作前需要用肥皂清洗雙手及手臂,用清水沖干凈,,穿好滅菌工作服,,戴好口罩和帽子,進(jìn)行操作前用75%的酒精擦洗雙手,,如戴乳膠手套,,乳膠手套也要擦拭75%的酒精??梢詫⑾居玫木凭b到一個(gè)噴壺里面,,這樣保證酒精噴灑均勻;也可以將脫脂棉球放到裝有酒精的廣口瓶中,,使用時(shí)用鑷子取出棉球擦拭手和乳膠手套,。

在超凈臺(tái)里面進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí),所使用的試劑和器材在使用前應(yīng)用火焰灼燒,,如培養(yǎng)瓶的打開(kāi)和擰緊的操作,,一般使用酒精燈火焰灼燒。一般使用的金屬器械不能進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間灼燒,,避免損傷器械,,導(dǎo)致生銹;金屬器械要等到冷卻以后再取動(dòng)物組織,。吸取過(guò)培養(yǎng)基和血清的耗材不能在火焰上加熱太長(zhǎng)時(shí)間,,避免其中的蛋白等物質(zhì)受熱產(chǎn)生有害物質(zhì),從而影響細(xì)胞的生長(zhǎng),。

產(chǎn)/品/推/薦






無(wú)菌,、活性、高效

【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸鹽緩沖液 1x

【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)

【SNM-002E】DMEM高糖*培養(yǎng)基(含10%血清,,雙抗)




公司簡(jiǎn)介


武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城,,專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù),,公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實(shí)驗(yàn)室,、動(dòng)物房,,已整體通過(guò)ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證,獲得企業(yè),、3551人才,、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項(xiàng)榮譽(yù),?! ?/span>


公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系、原代細(xì)胞,、胎牛血清,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、*培養(yǎng)基,、輔助試劑等系列產(chǎn)品,,提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購(gòu);細(xì)胞庫(kù)凍存細(xì)胞系500余種,,同時(shí)通過(guò)不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類,;公司還提供人源細(xì)胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等,?! ?/span>


公司細(xì)胞業(yè)務(wù)覆蓋國(guó)內(nèi)各大高校生物實(shí)驗(yàn)室、生物研究機(jī)構(gòu)及一些生物科研,、診斷,、制藥公司,不斷為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),!尚恩生物—您專業(yè)的細(xì)胞供應(yīng)商,!





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