動(dòng)物細(xì)胞分離培養(yǎng)準(zhǔn)備工作
動(dòng)物細(xì)胞分離培養(yǎng)是用無(wú)菌操作的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織(或器官)取出,,模擬動(dòng)物體內(nèi)的生理?xiàng)l件,在體外進(jìn)行培養(yǎng),,人們借以觀察細(xì)胞的生長(zhǎng),、增殖和細(xì)胞分化以及細(xì)胞凋亡或死亡的過(guò)程。因?yàn)榉蛛x的細(xì)胞沒(méi)有免疫防御系統(tǒng),,所以動(dòng)物細(xì)胞分離操作需要比外科手術(shù)更加嚴(yán)格的無(wú)菌操作,,無(wú)菌操作的原則就是保證細(xì)胞分離過(guò)程中的操作環(huán)境,使用的器械,、耗材以及試劑無(wú)菌,。
01
儀器:超凈工作臺(tái),、離心機(jī),、倒置顯微鏡、培養(yǎng)箱,、冰箱,、高壓蒸汽消毒裝置、移液器,。
02
器械:止血鉗,、手術(shù)刀、眼科剪,、手術(shù)剪,、鑷子、細(xì)胞過(guò)濾篩等,。所有器械清洗完以后,,使用棉布包裹,捆好后濕熱滅菌。
03
耗材:培養(yǎng)皿,、培養(yǎng)瓶,、離心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管),、移液管,、燒杯,。如果購(gòu)買的是無(wú)菌包裝的一次性耗材可以直接使用,,如果是玻璃材質(zhì)的用品,建議使用高壓蒸汽滅菌,。
04
試劑:75%的酒精和碘酒,、0.9%的生理鹽水、DBSS,、胰蛋白酶,、 DMEM(或PRMI-1640液體培養(yǎng)基、抗血凝劑,、血清,、二甲基亞砜(DMSO)。所使用的液體溶劑大部分使用過(guò)濾除菌的方式保證無(wú)菌,。培養(yǎng)基在使用前先在37℃水浴中升溫,。酶儲(chǔ)液放置于-20 ℃,稀釋以后放在4℃中保存,,因胰蛋白酶在37℃中降解比較快,,所以不建議酶升溫至37℃再使用,可以直接從4℃中取出用完后盡快放回冰箱,。因?yàn)閯?dòng)物組織比較珍貴,,建議試劑在使用前先測(cè)試是否染菌。
05
其他:冰塊,、脫脂棉球,、封口膜、記號(hào)筆,。
實(shí)/驗(yàn)/室/的/清/潔
【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸鹽緩沖液 1x
【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)
【SNM-002E】DMEM高糖*培養(yǎng)基(含10%血清,,雙抗)
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