白介素檢測試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定樣品中人白介素的水平。向預(yù)先包被了人白介素單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入白介素,,溫育;溫育后,,加入生物素標(biāo)記的抗白介素抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,,形成免疫復(fù)合物,,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,,然后加入底物A,、B,產(chǎn)生藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人白介素的濃度呈正相關(guān),。試劑盒的合理操作尤為重要,,以下是白介素檢測試劑盒試驗操作要點,為了確保實驗的成功大家可以大概了解一下,!
1,、為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜,。
2,、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
3、配制試劑時,,要用旋渦混合儀混勻,。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要,,使用微量振蕩器(使用zui低頻率),,如無微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標(biāo)板1分鐘,,例如做圓周動作,,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。
4,、各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間一般控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
5,、實驗用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴格按使用說明書規(guī)范操作,,并在使用前充分預(yù)熱。
6,、手工洗板應(yīng)注意:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,,重復(fù)此過程數(shù)次,。自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
7,、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。
8,、每次試驗測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
9,、嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
10,、所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,,使用時必須注意安全,。
11、從2-8℃取出的白介素檢測試劑盒,,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
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