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大鼠滑膜細胞的制備方法：
滑膜細胞的培養(yǎng)：將分離的滑膜組織用含青霉素200kU/L、鏈霉素200mg/L的D-Hank's液漂洗3次以減少污染機會,；去掉脂肪組織,，將16個滑膜組織樣本平均分為A、B兩份,。將A份不加處理分為A1,、A2、A3,、A4,、A5,、A6、A7,、A8八個樣品,，將B份用手術剪剪碎后分為B1、B2,、B3,、B4、B5,、B6,、B7、B8八個樣品,。分別采取4種不同方法進行處理,。
1)不加消化酶消化法：分別將A1、A2,、B1,、B2離心洗滌2次(2500r/min，離心6min),，吸棄上清液,，加入100μL100%的FBS混勻，用移液槍吸出注入培養(yǎng)瓶中,，放入CO2培養(yǎng)箱烘干15min，再將A1,、B1加入3mL體積分數(shù)20%的FBS吹打均勻,，A2、B2用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁,，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS,。
2)加Ⅱ型膠原酶消化法：將A3、A4,、B3,、B4離心洗滌2次(2500r/min，離心6min),，吸棄上清液,，吸取膠原酶Ⅱ至離心管中，輕輕吹打使組織塊重新懸浮,，移入培養(yǎng)瓶,，放入CO2培養(yǎng)箱消化，觀察組織成絮狀后,，加入1mL體積分數(shù)20%FBS終止消化,，用移液槍吸出，移入離心管離心(2500r/min，離心6min),，棄上清液,，放入培養(yǎng)瓶中，A3,、B3加入3mL體積分數(shù)20%FBS,，吹打均勻；A4,、B4用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁,，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS。
3)加胰蛋白酶消化法：將A5,、A6,、B5、B6離心洗滌2次(2500r/min,，離心6min),，吸棄上清液，吸取胰蛋白酶至離心管中,，輕輕吹打使組織塊重新懸浮,，移入培養(yǎng)瓶，放入CO2培養(yǎng)箱消化,，觀察組織成絮狀后,，加入體積分數(shù)20%FBS終止消化，用移液槍吸出,，移入離心管離心(2500r/min,，離心6min)。棄上清液,，放入培養(yǎng)瓶中,，A5、B5加入3mL體積分數(shù)20%FBS,，吹打均勻,；A6、B6用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁,，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS,。
4)先加Ⅱ型膠原酶消化法再加胰蛋白酶消化：將A7、A8,、B7,、B8離心洗滌2次(2500r/min，離心6min),，吸棄上清液,，吸取膠原酶Ⅱ至離心管中,，輕輕吹打使組織塊重新懸浮，移入培養(yǎng)瓶,，放入CO2培養(yǎng)箱消化,，觀察組織成絮狀后，取出培養(yǎng)瓶,，仔細吹打使組織塊分散,，將未黏附細胞移入離心管離心(2500r/min，離心6min),，棄上清液,，再加D-Hank's液洗滌，離心,，吸棄洗滌液,，重復離心3次，吸取胰蛋白酶至離心管中,，輕輕吹打使組織塊重新懸浮,，移入培養(yǎng)瓶，放入CO2培養(yǎng)箱消化,，消化結束取出培養(yǎng)瓶,，加入體積分數(shù)20%FBS終止消化，用移液槍吸出,，移入離心管離心(2500r/min,，離心6min)。棄上清液,，放入培養(yǎng)瓶中,，A7、B7加入3mL體積分數(shù)20%FBS,，吹打均勻；A8,、B8用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁,，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS。
5)結果：培養(yǎng)9d后,，觀察各培養(yǎng)瓶中細胞的成活個數(shù)和生長狀況,，組織剪碎不加消化酶人工貼壁培養(yǎng)的細胞得數(shù)為2.03×106，是所有培養(yǎng)方法中細胞的數(shù)最多的,。細胞活力為95%,，與組織剪碎加膠原酶Ⅱ消化后人工貼壁培養(yǎng)同為各種培養(yǎng)方法中細胞活力*強的，綜合考慮*方法為組織剪碎不加消化酶人工貼壁培養(yǎng),。
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