非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）說明書 

【產品名稱】 通用名稱：非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法） 

英文名稱：API 20 NE 

【包裝規(guī)格】 25 測試/盒 

【預期用途】 該產品用于非苛養(yǎng),、非腸道革蘭陰性桿菌的鑒定,。 該產品用于鑒定非苛養(yǎng),、非腸道革蘭陰性桿菌（如假單胞菌屬,、不動桿菌屬,、黃桿菌屬,、莫拉菌屬,、弧菌屬 和氣單胞菌屬等）的標準鑒定系統(tǒng)，包括 8 個常規(guī)試驗,、12 個同化試驗和 1 個數據庫,。 

【檢驗原理】 API 20 NE 試劑條由裝有脫水底物的 20 個微型管構成。常規(guī)試驗接種重溶培養(yǎng)基的鹽水細菌懸液,。在 培養(yǎng)過程中,，代謝產生顏色變化，此變化可為自發(fā)或通過加入試劑顯示,。同化試驗接種培養(yǎng)基，如果它 們能夠使用相應的底物,，則細菌生長,。依照讀數表讀取反應，通過參考分析曲線指標或使用鑒別軟件得到鑒 別,。

【主要組成成分】 試劑盒組成(25 種實驗) - 25 個 API 20 NE 試劑條 - 25 個孵育盒 - 25 安瓿 API AUX 培養(yǎng)基 - 25 張結果單 試劑條成分 在本說明書的判讀表中,，給出了 API 20 NE 試劑條的組成。

需要但沒有提供的試劑和材料 試劑 - API NaCl 0.85 %培養(yǎng)基, 2 mL (Ref. 20 070) - 試劑 JAMES (Ref. 70 542) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)  Zn (Ref. 70 380) - 氧化酶 (Ref. 55 635*) * 參照品未在某些國家出售：采用同等試劑,。 IVD非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法） 版本號 07615K - zh –2009/11 2 - 礦物油 (Ref. 70 100) 材料 - 移液管或 PSIpetter - 安瓿保護器 - 安瓿架 - 一般微生物實驗室設備 

【儲存條件及有效期】 2~8℃儲存,，有效期為 12 個月。

生產日期：詳見外包盒標簽,。

有效期至：詳見外包盒標簽,。 

【適用儀器】 - 麥氏標準比濁管 (Ref. 70 900) No. 0.5 - API 20 NE 分析鑒定系統(tǒng) (Ref.20 090) 或 apiweb™鑒定軟件 (Ref.40 011) (咨詢生物梅里埃) 

【樣本要求】 API 20 NE 不直接用于臨床或其他標本。 按照標準微生物學技術,，必須首先在適合的培養(yǎng)基（如胰蛋白酶解酪蛋白）上分離要鑒定的微生物,。 

【檢驗方法】 氧化酶試驗 必須按照生產商的使用說明，進行氧化酶試驗,。應當在結果單上記錄結果,，因為它是最后圖譜的一個有 機部分（第 21 個鑒定試驗）。

菌落 API 20 NE 只應用于不屬于腸桿菌科的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌,。 注 1：有些非腸道的革蘭陰性桿菌亦為氧化酶陰性（嗜麥芽黃單胞菌,、不動桿菌…）,。這些微生物也可以 用 API 20 NE 鑒定，但必須根據其它細菌學或臨床標準加以選擇,。 注 2：對營養(yǎng)要求多或需要適當處理注意事項的苛養(yǎng)微生物（如布魯氏菌和弗朗西絲氏菌）,，未包含在 API  20 NE 的數據庫內。必須采用其他方法排除或證實它們的存在,。

試條的準備 準備一個培養(yǎng)盒,、盤和蓋子，向盤的底部倒入約 5mL 蒸餾水或去離子水【或任何不含添加劑或可能釋放 氣體（如氯氣,、二氧化碳等）的化學物的水】,，創(chuàng)造一種濕氣。在盤的邊緣部分記錄標本編號,。（不要在蓋上 記錄編號,，因為在操作期間它可能錯位。）從各個包裝中取出試劑條,。將試劑條放入培養(yǎng)盒中,。

接種物的準備 

? 按照本產品說明書“警告和注意事項”段落所示，打開一安瓿 API NaCI 0.85 %培養(yǎng)基（2 mL）,，或使 用含 2 mL 不含添加劑的 0.85 %生理鹽溶液,。

? 使用吸管或滴管，通過抽吸或通過連續(xù)接觸,，從瓊脂糖培養(yǎng)基上挑取 1 - 4 個形態(tài)相同的克隆,。建議 使用早期培養(yǎng)物（18 - 24 小時）。

? 配制混懸液至濁度等于 0.5 McFarland,。此混懸液在配制后必須立即使用,。 注：調整接種物密度至 0.5 McFarland 非常重要；否則 API 20 NE 試劑條試驗可能不能正確發(fā)揮功能,。 特別是,，較弱的接種物可能導致假陰性結果。在操作試劑條的過程中,，不要接觸反應杯,，接種后不要將試劑 條長時間暴露空氣。 

試條的接種非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法） 版本號 07615K - zh –2009/11 3

? 用同一根吸管將鹽水混懸液加到試驗管（不是反應杯）,，接種試驗 NO3到 PNPG,。將試劑條稍前傾，將吸 管或滴管的頂部靠在杯的側面,，以避免管的底部形成氣泡,。 

? 按照“警告和注意事項”中所示，打開 1 個 API AUX 培養(yǎng)基安瓿,，向安瓿加入約 200 ? L 剩余的鹽混懸液,。 用吸管混勻,，避免形成氣泡。

? 用混懸液注滿由 GLU 至 PAC 試驗管和杯,。當心液面必是平的或稍凸,，不能呈凹或新月形。杯子裝得不 滿或過滿可能給出不正確的結果,。

? 向 3 個下劃線試驗（GLU,、ADH 和 URE）的杯子加礦物油，直至形成凸出的新月形,。

? 蓋上培養(yǎng)盒,，在 29°C ± 2°C 培養(yǎng) 24 小時（± 2 小時）。 【陽性判斷值】 對于不同生化反應預期結果的范圍,，查閱本說明書末尾的鑒別表,。 【檢驗結果的解釋】 讀取試劑條

? 孵育期后，通過參閱判讀表,，判讀試劑條,。 

? 在結果單上記錄所有自發(fā)反應（GLU、ADH,、URE,、ESC、 GEL 和 PNPG）,。

? 為保護同化反應免受空氣播散的污染,，應當進行兩個試驗 NO3 和 TRP 的判讀。要做這一點,，在 NO3 和 TRP 試驗判讀期間,，用培養(yǎng)盒蓋子遮蓋同化反應,。 

? NO3試驗： - 各加一滴 NIT1 和 NIT2 試劑至 NO3杯,。 - 5 分鐘后，紅色表示陽性反應,，記錄在報告單上,。 - 由于氮氣的產生（表現為存在小氣泡）有可能引起陰性反應：加 2~3 mg Zn 試劑到 NO3杯中。 - 5 分鐘后,，保持無色的杯子表明陽性反應,，記錄在報告單上。如果杯子變?yōu)榉奂t色,，反應為陰性,，因為管 中存在硝酸鹽，被鋅還原為亞硝酸鹽,。 用于細菌鑒定的反應是硝酸鹽還原,。當上述二個反應（產生 NO2或 N2）中的任何一個為陽性時,，硝酸鹽 還原反應為陽性。 但是,，N2的產生則可單獨用作補充試驗（參閱分析圖譜索引）,。 

? 檢測： 加 1 滴 JAMES 試劑。立即發(fā)生反應：全杯出現粉紅色表明陽性結果,，記錄在結果單上,。

? 同化試驗：觀察細菌生長。不透明杯子表明陽性反應,。 偶爾,，1 個杯子顯示為弱生長。在這種情況,，通過與試劑條上的其他試驗強度比較,，結果應當記錄為 或 ±。 

注意: 一旦進行了上述判讀,，如“解釋”段落中所示,，鑒定是可能的。在下列情況,，必須重新孵育： - 無區(qū)別 - 無法接受或可疑的圖譜,； - 如果對獲得的圖譜標注了以下備注： 在 48 小時孵育前鑒定是無效的 使用習慣或滴管，通過抽吸吸走 NIT 1,、NIT 2 和 JAMES 試劑,，立即用礦物油掩蔽試驗 NO3和 TRP，以便形 成凸的新月形,。在 29°C ± 2°C 重新孵育 24 小時,，除了只應在 24 小時判讀的前 3 個試驗（NO3、TRP 和 GLU）,， 其余試驗再讀一次結果,。 

說明： 采用數字譜獲得鑒定。

? 測定使用率： 在結果表上,，將結果分成 3 組,，每組標記為編號 1、2 或 4,。在每組內加陽性反應相應的數字,，得到一個 7 位數；氧化酶反應構成第 21 個反應,，如果為陽性則數值為 4,。 

? 鑒定：非苛養(yǎng)非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法） 版本號 07615K - zh –2009/11 4 這采用數據庫（V7.0）進行 * 棒狀桿菌鑒定用編碼冊 - 查找圖譜中的數字譜。 * 采用 apiweb™鑒定軟件 - 通過鍵盤手動輸入 7 位數的數字譜。