培養(yǎng)用液是維護(hù)組織細(xì)胞生存,、生長(zhǎng)及進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)各項(xiàng)操作過程中所需的基本溶液,。常用的細(xì)胞培養(yǎng)試劑包括：超純水,，平衡鹽溶液,，消化液,，PH調(diào)整液,，谷氨酰胺溶液,，抗生素溶液,。

常見的超純水

1. 使用純水機(jī)純化而來,；

2. 蒸餾水和離子交換水

3. 三蒸水

平衡鹽溶液

1、平衡鹽溶液主要由無機(jī)鹽,、葡萄糖組成,，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng),。主要用于取材時(shí)組織塊的漂洗,、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等,。

2,、D-Hank’s與Hank’s的一個(gè)主要區(qū)別在于前者不含有Ca2+、Mg2+,，因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液,。

3、配制平衡鹽溶液也應(yīng)當(dāng)用三蒸水,。如果配方中含有Ca2+,、Mg2+,，應(yīng)當(dāng)首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫高壓滅菌.

幾種常見的平衡鹽溶液配方：

消化液

（1）以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶為例,，稱取胰蛋白酶粉末0.625g置燒杯中,，先用少許D-Hanks 或PBS平衡鹽溶液（pH7.2 左右）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks 平衡鹽溶液,，并不斷攪拌振蕩直到攪拌混勻,，置室溫4 小時(shí)或冰箱過夜；

（2）次日,，先用濾紙粗濾,，再進(jìn)行過濾除菌，定容至250ml,，分裝于鹽水瓶或三角瓶,，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫让赋Ｓ脻舛葹?.25% 或0.125%,。

胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架,，從而使細(xì)胞分離,。

胰蛋白酶液濃度越高，作用越強(qiáng),，但超過一定限度會(huì)損傷細(xì)胞,。

胰蛋白酶是一種黃白色粉末，用無Ca2+,、Mg2+的PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是0.25％ ,。用濾器過濾除菌。

胰蛋白酶液消化時(shí)間：2-10分鐘,，用含血清培養(yǎng)液終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用。

pH調(diào)整液

常用的有HEPES液和NaHC03溶液

 1.NaHC03溶液:NaHC03是培養(yǎng)基中必須添加的成分,，一般情況下是按照說明書的要求準(zhǔn)確添加,，以保證培養(yǎng)基在5%CO2的環(huán)境下pH達(dá)到設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。

 2．HEPES液：HEPES是一種弱酸,，中文名稱是羥乙（乙）基哌（派）嗪乙硫磺酸,。HEPES對(duì)細(xì)胞無毒性，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動(dòng)

100X的Hepes配制：取23.8g的HEPES溶于90ml的雙蒸水中 ,，用1N的NAHCO3調(diào)PH至7.8-8.0之間,，過濾除菌，定容至100ml.

谷氨酰胺補(bǔ)充液:

谷氨酰胺在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,，合成培養(yǎng)基中都要添加,，由于谷氨酰胺容易降解,，所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L,。

一般配制為100倍濃縮液,，配制時(shí)應(yīng)加溫至30℃，*溶解后過濾除菌,，分裝至小瓶,，儲(chǔ)存于-20℃。

抗生素溶液:

常用的是青鏈霉素,，俗稱“雙抗溶液”,。

青霉素主要對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有效，鏈霉素主要對(duì)革蘭陰性菌有效,。加入這兩種抗生素可預(yù)防絕大多數(shù)細(xì)菌的污染,。

青霉素使用的終濃度為100000U/L，鏈霉素使用的終濃度為0.1g/L,。一般配制成100倍濃縮液,，可用PBS或培養(yǎng)基配制。