規(guī)格：100管/96樣

葡萄糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)（測(cè)組織,、細(xì)菌或細(xì)胞）

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物,。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng),、肌肉,、脂肪組

織等的唯*#一能源,，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān),。

測(cè)定原理：

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫；過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物,，在 505 nm 有特征吸收峰,。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水

試劑的組成和配制：

試劑一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑二：液體 10ml×1 瓶，4℃保存,；

試劑三：液體 10ml×1 瓶,，4℃保存；

葡萄糖提?。?/font>

1,、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水）,，研磨成勻漿,，95℃水浴10分鐘（蓋緊，防止水分散失）,，冷卻后,，8000g，25℃離心10min,，取上清液備用,。

2、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率20％或200W,，超聲3S，間隔10S,，重復(fù)30次）,，95℃水浴10分鐘（蓋緊，防止水分散失）,，冷卻后,，8000g，25℃離心 10min,，取上清液備用,。

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,，用多少配多少,。

3、加樣表（在EP管或96孔板中加入下列試劑）：

混勻,，置 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25'C（其它物種）保溫 15min 后,，于 505nm 波長(zhǎng)處讀取吸光

度?？瞻坠?、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光值分別記為 A1、A2 和 A3,?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

葡萄糖含量計(jì)算：

1,、按樣本蛋白濃度計(jì)算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr,。

2、按樣本鮮重計(jì)算

葡萄糖含量（µmol/g 鮮重）= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

3,、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

葡萄糖含量（µmol/10⁴cell)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)

=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度,，0.5µmol/mL；V1：加入樣本體積,，0.1mL,；V2：加入提取液體積，1mL,；

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本鮮重,，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn),。

注意：最*-低檢測(cè)限為 50nmol/g  鮮重或 0.5nmol/mg prot

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：