1.技術(shù)背景

  米酵菌酸（Bongkrekic acid,，BA）是由椰毒假單胞菌屬酵米面亞種產(chǎn)生的一種可以引起食物中毒的呼吸系統(tǒng)性毒素,。其結(jié)構(gòu)如下圖所示,，它是一種脂溶性酸性化合物,，主要產(chǎn)生于谷類發(fā)酵制品、變質(zhì)椰子食品及鮮銀耳類產(chǎn)品中,，攝入受其污染的食物會引發(fā)中毒,，嚴(yán)重可致死亡。

目前市面上常用方法以及國標(biāo)規(guī)定方法為固相萃取柱凈化和液液萃取的凈化方法,，可能會面臨操作復(fù)雜,、有機(jī)試劑消耗大、干擾多,、回收率低等問題,，Pribolab技術(shù)研發(fā)中心基于現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)方法的不足和局限性，建立了多功能凈化柱“一步法”凈化,，可用于液相色譜二極管陣列檢測器或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測食品中的米酵菌酸殘留,，具有前處理簡單快速、環(huán)保低有機(jī)試劑消耗,、回收率高,，凈化效果好的特點(diǎn)，適用于各類食品基質(zhì)中米酵菌酸的測定,。

2.實(shí)驗(yàn)方法

參考食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-食品中米酵菌酸的測定（GB 5009.189-2016）,，優(yōu)化前處理方法，使其適用于“一步法”快速高效凈化,。

2.1實(shí)驗(yàn)試劑耗材

Pribolab® 500μg/mL米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（乙腈）

Pribolab®·ODS·C18 液相色譜柱

PriboFast® MFC 335多功能凈化柱

PriboFast玻璃纖維濾紙

乙腈水提取液：量取84 mL乙腈用水定容至100 mL，混勻備用,。

2.2樣品制備與提取

干試樣經(jīng)粉碎過篩,，濕試樣經(jīng)充分均質(zhì)，稱取25.0g試樣置于錐形瓶中，加入100mL乙腈水提取液,，混勻,，超聲提取30min，5000 r/min離心5分鐘或用玻璃纖維濾紙過濾,，待凈化,。

2.3試樣的凈化

取8mL上清液加入透明玻璃管中，使液體通過PriboFast® 335多功能凈化柱完成凈化,。取凈化后的溶液過濾膜后上液相或液質(zhì)分析,。

3.液相液質(zhì)條件

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1 米酵菌酸液相色譜圖

          圖2米酵菌酸液質(zhì)TIC圖

4.2結(jié)果分析

米酵菌酸結(jié)構(gòu)式含有3個羧基（-COOH）,，酸性較強(qiáng),，容易丟失質(zhì)子而帶上負(fù)電荷，其保留因子和選擇性受pH值影響大,，當(dāng)流動相條件為酸性時可避免離子化從而得到對稱色譜峰,。因此液相色譜采用甲醇+1%乙酸水（80:20）為流動相，分離效果好,，方法檢出限為0.2μg/g,。在液質(zhì)檢測中0.1%甲酸水-乙腈為流動相，同樣酸性環(huán)境抑制了米酵菌酸的電離,，使其以分子形式存在,，在反向固定相中的保留增強(qiáng)，且減少了與固定相中殘存硅醇基的結(jié)合,，有助于改善峰型,，方法檢出限0.1μg/kg。

 本次實(shí)驗(yàn)選取了常被米酵菌酸污染的食品酸湯子,、米粉,、銀耳進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，加標(biāo)水平2 mg/kg,每種加標(biāo)做6個平行,。結(jié)果如下表所示,。

5.結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立多功能凈化柱“一步法”凈化食品中的米酵菌酸，具有前處理簡單高效,，回收率高的特點(diǎn),，適用于液相以及液質(zhì)方法檢測米酵菌酸殘留，對食品風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定具有指導(dǎo)意義,。

實(shí)驗(yàn)耗材采購指南