一,、樣品前處理

1,、所用試劑

1,、1  濃鹽酸,，優(yōu)級純

1,、2  6mol/L 鹽酸：濃鹽酸與水1:1混合

1,、3  水：去離子水

1,、4  苯酚：須重蒸

1,、5  19種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

2,、標(biāo)樣配置

•  氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：含有天冬氨酸、蘇氨酸等17種常見組成蛋白質(zhì)的氨基酸,。

•    ?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

•    正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

•    璜基丙氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

• 蛋氨酸砜標(biāo)準(zhǔn)儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

• 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

• 鳥氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

將17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液,、牛磺酸,、正亮氨酸,、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜,、羥脯氨酸,、鳥氨酸及PH2.2的檸檬酸緩沖液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)品待用。

3,、前處理設(shè)備

1)     天平   

2)     水解管  

3)     量筒  

4)     無油真空泵  

5)     干浴水解,、濃縮儀  

6)     移液管  

7)     0.45um濾膜   

4、樣品制備（參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC ）

1,、樣品的準(zhǔn)備

粉碎樣品,，通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥,。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油（3.12）脫脂,。

2、氧化

從準(zhǔn)備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品,，準(zhǔn)確到0.2mg,，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮,，水分不能超過100mg,。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過甲酸苯酚）,，用帶彎頭的玻璃刮勺混合,。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,，放置16小時,。之后，從冰箱中取出,，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來分解過量的氧化試劑。

3,、水解

 加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中,，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂）,，水解1小時,。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護眼罩）將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時,。

4、加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后,，將反應(yīng)瓶從烘箱中取出,，并且打開瓶口（戴手套和護目鏡）。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,，混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中,。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實驗燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。轉(zhuǎn)移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中,?？梢择R上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定。

二,、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1)  色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,，4.6X20cm

2)  分離程序：

3)     運行時間：分析時間65min

4)     反應(yīng)單元溫度：135°C。

5)     檢測波長：570nm,、440nm同時檢測,。

附、魚料分析圖譜及做樣結(jié)果