本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大白鼠類風(fēng)濕因子（RF）水平,。用純化的大白鼠類風(fēng)濕因子（RF）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入類風(fēng)濕因子（RF）,，再與HRP 標(biāo)記的類風(fēng)濕因子（RF）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。

操作步驟

1,、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本大白鼠類風(fēng)濕因子RF試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

40 U/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 U/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 U/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0.5 U/L 2 號標(biāo)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0.25 U/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2,、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4,、配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用。

5,、洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去,，此重復(fù)5 次,，拍干。

6,、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7,、溫育：操作同3,。

8、洗滌：操作同5,。

9,、顯色：大白鼠類風(fēng)濕因子RF每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15 分鐘,。

10、終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11、測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。