在ELISA試劑盒的使用過程中常見問題有很多如, 加樣器不確,;尤其10ul以下的加樣器,,對結(jié)果影響極大,; 保溫設(shè)備不良; 洗滌用水不規(guī)范,。
如何解決這些問題呢:
1在使用過程校正加樣器,;10ul以下加樣器采用進(jìn)口產(chǎn)品(芬蘭、法國等),;
2 仔細(xì)校正溫度到37℃,,水浴箱為佳;
3 必須使用去離子水或蒸餾水,,不得用自來水,、礦泉水等;
4 認(rèn)真閱讀使用說明書,。
樣品加樣:
1 加樣不準(zhǔn)確; 2 沒有混勻,。 加樣時一定要仔細(xì),。加樣后,再檢查,,以防漏加,、錯加。
2 加樣后,,反復(fù)抽吸3次混勻,,防止血清聚集孔底,導(dǎo)致非特異性吸附,。 洗滌 洗滌不* ①每次注水洗滌,,應(yīng)靜止30秒鐘;②選用吸水紙作為襯墊,,每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分,;
3 可選用塑料洗滌瓶。 加酶反應(yīng) 漏加 滴加后,,認(rèn)真檢查各孔 結(jié)果判斷 ①包括陰性對照孔在內(nèi),,各孔顯色普遍偏深;②包括陽性對照在內(nèi),,各孔均無顯色,;③陽性對照不顯色,而其它樣本顯色正常,;
4 有些標(biāo)本顯色不深,,判斷陽性困難。 ①可能是洗滌不充分,;加樣過量,;溫育時間過長溫度過高,;按說明書重新操作。如無改善,, 可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系,;②可能是漏加樣本或酶液;溫育時間過短溫度過低,;試劑保存不當(dāng)活性下降,;按說明書重新 操作。如無改善,,可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系,;③陽性對照漏加、錯加或失效,。重新操作,。如無改善,可與廠家聯(lián)系,,索要對照品,; ④重新操作。使用酶標(biāo)儀,,測定光吸收度,,按P/N值標(biāo)準(zhǔn)判斷。 ELISA試劑盒保存 保存不規(guī)范 一定要在2-8℃存放,。不得過高,,也不得凍存(凍存后,酶液將失效),。 對照品 對照品為凍干品 按對照管標(biāo)示,,加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶,充分溶解混勻,??砂凑f明書使用。
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