正立式顯微鏡

      一、明視野觀察（Bright field）

      明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,，廣泛應(yīng)用于病理,、檢驗(yàn)，用于觀察被染色的切片，所有顯微鏡均能完成此功能。在此不再贅述。

      二,、暗視野觀察（Dark field）

      暗視野實(shí)際是暗場(chǎng)照明發(fā)。它的特點(diǎn)和明視野不同,，不直接觀察到照明的光線,，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,，視場(chǎng)成為黑暗的背景,，而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。

暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象,，微塵在強(qiáng)光直射通過(guò)的情況下,，人眼不能觀察，這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的,。若把光線斜射它,，由于光的反射，微粒似乎增大了體積,，為人眼可見(jiàn),。

      暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過(guò)被檢物體,，而是將光線改變途徑,，使其斜射向被檢物體，使照明光線不直接進(jìn)入物鏡,，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象,。

      暗視野觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明視野觀察，zui高達(dá)0.02-0.004mm..

      三,、相襯鏡檢法（Phase contrast）

      在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中,，相襯鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就,。我們知道,，人眼只能區(qū)分光波的波長(zhǎng)（顏色）和振幅（亮度），對(duì)于無(wú)色通明的生物標(biāo)本,，當(dāng)光線通過(guò)時(shí),，波長(zhǎng)和振幅變化不大，在明場(chǎng)觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本.

      相襯顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢,，也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象,，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o(wú)色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見(jiàn),。這大大便利了活體細(xì)胞的觀察,，因此相襯鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。

      相襯鏡檢法在裝置上與明場(chǎng)不同,，有一些特殊要求：

      1．環(huán)狀光闌（Ring slit）: 裝在聚光鏡的下方,，而與聚光鏡組合為一體---相襯聚光鏡。它是由大小不同的環(huán)形光闌裝在一圓盤(pán)內(nèi),，外面標(biāo)有10X,、20X、40X,、100X等字樣,，與相對(duì)應(yīng)倍數(shù)的物鏡配合使用。

      2．相板（Phase plate）: 裝在物鏡的后焦平面處,，它分為兩部分,，一是通過(guò)直射光的部分，為半透明的環(huán)狀,，叫共軛面,；另一是通過(guò)衍射光的部分，叫"補(bǔ)償面",。有相板的物鏡稱(chēng)"相襯物鏡",，外殼上常有"Ph"字樣。

相襯鏡檢法是一種比較復(fù)雜的鏡檢方法,，想要得到好的觀察效果,，顯微鏡的調(diào)試非常重要。除此之外還應(yīng)注意以下幾個(gè)方面,。

      1．光源要強(qiáng),，全部開(kāi)啟孔徑光闌；

      2．使用濾色片,，使光波近于單色,；

      四、微分干涉稱(chēng)鏡檢術(shù)（Differential interference contrast DIC）

      微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,，它不僅能觀察無(wú)色透明的物體,，而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,，并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn)，觀察效果更為逼真,。

      1．原理

微分干涉稱(chēng)鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來(lái)分解光束,。分裂出來(lái)的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強(qiáng)度相等，光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過(guò)被檢物體,，在相位上略有差別,。由于兩光束的裂距極小，而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象,，使圖象呈現(xiàn)出立體的三維感覺(jué),。

      2．微分干涉稱(chēng)鏡檢術(shù)所需的特殊部件：

     （1） 起偏鏡

     （2） 檢偏鏡

     （3） 渥拉斯頓棱鏡2 塊

      3．微分干涉稱(chēng)鏡檢時(shí)的注意事項(xiàng)

     （1）因微分干涉襯靈敏度高，制片表面不能有污物和灰塵,。

     （2）具有雙折射性的物質(zhì),，不能達(dá)到微分干涉襯鏡檢鏡檢的效果。

     （3）倒置顯微鏡應(yīng)用微分干涉襯時(shí),，不能用塑料培養(yǎng)皿,。

      
      五、熒光鏡檢術(shù)

      熒光鏡檢術(shù)是用短波長(zhǎng)的光線照射用熒光素染色過(guò)的被檢物體,，使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光,，然后觀察。熒光鏡檢術(shù)廣泛應(yīng)用于生物,，醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域,。
      1．熒光鏡檢術(shù)一般分為透射和落射式兩種類(lèi)型。
      （1）透射式：激發(fā)光來(lái)自被檢物體的下方,，聚光鏡為暗視野聚光鏡,，使激發(fā)光不進(jìn)入物鏡，而使熒光進(jìn)入物鏡,。它在低倍情況下明亮,，而高倍則暗，在油浸和調(diào)中時(shí),，較難操作,，尤以低倍的照明范圍難于確定，但能得到很暗的視野背景,。透射式不使用于非透明的被檢物體,。
      （2）落射式：透射式目前幾乎被淘汰，新型的熒光顯微鏡多為落射式,，光源來(lái)自被檢物體的上方,，在光路中具有分光鏡，所以對(duì)透明和不透明的被檢物體都適用,。由于物鏡起了聚光鏡的作用,，不僅便于操作,，而且從低倍到高倍，可以實(shí)現(xiàn)整個(gè)視場(chǎng)的均勻照明,。
      2．熒光鏡檢術(shù)的注意事項(xiàng)
      （1） 激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射,，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象，因此盡可能縮短觀察時(shí)間,，暫時(shí)不觀察時(shí)，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光,。
      （2）作油鏡觀察時(shí),，應(yīng)用“無(wú)熒光油”。
      （3）熒光幾乎都較弱,，應(yīng)在較暗的室內(nèi)進(jìn)行,。
      （4）電源裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命,，也會(huì)影響鏡檢的效果,。
      目前許多新興生物研究領(lǐng)域應(yīng)用到熒光顯微鏡，如基因原位雜交（FISH）等等,。

偏光顯微鏡（Polarizing microscope ） 
 
      一,、偏光顯微鏡的特點(diǎn)

      偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì),，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,，當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來(lái)進(jìn)行觀察，但有些則不可能,，而必須利用偏光顯微鏡,。
偏光顯微鏡的特點(diǎn)，就是將普通改變?yōu)槠膺M(jìn)行鏡檢的方法,，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）,。
雙折射性是晶體的基本特性。因此,，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物,，化學(xué)等領(lǐng)域。在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用,。
     
      二,、偏光顯微鏡的基本原理

      偏光顯微鏡的原理比較復(fù)雜，在此不作過(guò)多介紹,偏光顯微鏡必須具備以下附件（a）起偏鏡 （b）檢偏鏡 （c）無(wú)應(yīng)力物鏡 （d）旋轉(zhuǎn)載物臺(tái),。

      三,、偏光鏡檢術(shù)的方式

      （一） 正相鏡檢（Orthscope）:又稱(chēng)無(wú)畸變鏡檢，其特點(diǎn)是使用低倍物鏡,，不用伯特蘭透鏡（Bertrand Lens）,同時(shí)為使照明孔徑變小,，推開(kāi)聚光鏡的上透鏡,。
正相鏡檢用于檢查物體的雙折射性。

      （二） 錐光鏡檢（Conoscope）：又稱(chēng)干涉鏡檢,，這種方法用于觀察物體的單軸或雙軸性,。 

      四、 偏光顯微鏡在裝置上的要求

      （一） 光源：采用單色光,，因?yàn)楣獾乃俣?，折射率，和干涉現(xiàn)象由于波長(zhǎng)的不同而有差異,。一般鏡檢可使用普通光,。 
      （二） 目鏡：要帶有十字線的目鏡。 
      （三） 聚光鏡：為了取得平行偏光,，應(yīng)使用能推出上透鏡的搖出式聚光鏡,。 
      （四） 伯特蘭透鏡：這是把物體所有造成的初級(jí)相放大為次級(jí)相的輔助透鏡。 

      五,、偏光鏡檢術(shù)的要求

      （一） 載物臺(tái)的中心與光軸同軸,。
      （二） 起偏鏡和檢偏鏡應(yīng)處于正交位置。
      （三） 制片不宜過(guò)薄,。

倒置顯微鏡（Inverted microscope）

      前面講的是正立式顯微鏡的鏡檢方式,，主要用于切片的觀察。而倒置顯微鏡是為了適應(yīng)生物學(xué),、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的組織培養(yǎng),、細(xì)胞離體培養(yǎng)、浮游生物,、環(huán)境保護(hù),、食品檢驗(yàn)等顯微觀察。 
      由于上述樣品特點(diǎn)的限制,，被檢物體均放置在培養(yǎng)皿（或培養(yǎng)瓶）中,，這樣就要求倒置顯微鏡的物鏡和聚光鏡的工作距離很長(zhǎng)，能直接對(duì)培養(yǎng)皿中的被檢物體進(jìn)行顯微觀察和研究,。因此,，物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過(guò)來(lái),，故稱(chēng)為“倒置顯微鏡”,。
由于工作距離的限制，倒置顯微鏡物鏡的zui大放大率為60X,。一般研究用倒置顯微鏡都配置有4X,、10X、20X,、及40X 相差物鏡,，因?yàn)榈怪蔑@微鏡多用于無(wú)色透明的活體觀察,。如果用戶(hù)有特殊需要，也可以選配其它附件,，用來(lái)完成微分干涉,、熒光及簡(jiǎn)易偏光等觀察。
目前倒置顯微鏡廣泛應(yīng)用于patch-clamp ,transgene ICSI 等領(lǐng)域,。

體視顯微鏡（Stereo microscope）

      體視顯微鏡又稱(chēng)“實(shí)體顯微鏡”或“解剖鏡”,，是一種具有正象立體感地目視儀器，被廣泛地應(yīng)用于生物學(xué),、醫(yī)學(xué),、農(nóng)林、工業(yè)及海洋生物各部門(mén),。它具有如下地特點(diǎn)：
      1． 雙目鏡筒中的左右兩光束不是平行，而是具有一定的夾角---體視角（一般為12度---15度）,，因此成象具有三維立體感,；
      2． 象是直立的，便于操作和解剖,，這是由于在目鏡下方的棱鏡把象倒轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)的緣故,；
      3． 雖然放大率不如常規(guī)顯微鏡，但其工作距離很長(zhǎng)
      4． 焦深大,，便于觀察被檢物體的全層,。
      5． 視場(chǎng)直徑大。
      目前體視鏡的光學(xué)結(jié)構(gòu)是：由一個(gè)共用的初級(jí)物鏡,，對(duì)物體成象后的兩光束被兩組中間物鏡----變焦鏡分開(kāi),，并成一體視角再經(jīng)各自的目鏡成象，它的倍率變化是由改變中間鏡組之間的距離而獲得的,，因此又稱(chēng)為“連續(xù)變倍體視顯微鏡”（Zoom—stereo microscope）,。
      隨著應(yīng)用的要求，目前體視鏡可選配豐富的選購(gòu)附件,，如熒光,，照相，攝象,，冷光源等等,。