www.xmbio.com20世紀(jì)90年代起，分子生物學(xué)進(jìn)入臨床檢測(cè),。短短的幾年中,，以聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）為核心的分子生物學(xué)技術(shù)深入到臨床多個(gè)領(lǐng)域,。在臨床檢驗(yàn)中心，我國(guó)分子生物學(xué)在遺傳病診斷及產(chǎn)前篩查,、腫瘤診斷與療效預(yù)后判斷,、微生物耐藥機(jī)理的研究等方面取得較突出的成績(jī)。

  一,、微流控芯片（microfluidic chip）技術(shù)

     微流控芯片技術(shù)是芯片技術(shù)與毛細(xì)管電泳聯(lián)合應(yīng)用的定量檢測(cè)技術(shù),。它可用于核酸（DNA和RNA）、蛋白質(zhì)及細(xì)胞的檢測(cè),，并已產(chǎn)品化,。進(jìn)行微流控芯片檢測(cè)時(shí)，應(yīng)將樣品,、對(duì)照和指示劑系統(tǒng)導(dǎo)入預(yù)先已有復(fù)雜毛細(xì)管道刻蝕的芯片上,，經(jīng)過(guò)電泳技術(shù)，利用內(nèi)對(duì)照系統(tǒng)對(duì)產(chǎn)物準(zhǔn)確定量,。

   微流控芯片技術(shù)在核酸檢測(cè)中引入了防污染系統(tǒng),，有效排除了假陽(yáng)性。其與微點(diǎn)陣芯片不同的是每個(gè)芯片可用于多個(gè)臨床樣品檢測(cè),，每個(gè)芯片可重復(fù)使用20次,。如以DNA芯片檢測(cè)為例，特異性由PCR控制,，可提供檢測(cè)平臺(tái)和菜單式服務(wù),。此類的某些芯片每孔至少可供5個(gè)不同PCR產(chǎn)物同時(shí)進(jìn)行分析。

該項(xiàng)檢測(cè)目前已應(yīng)用于乙型肝炎病毒（HBV）基因分型,、HBV基因某些變異（如1896c變異,、抗拉米呋定YMDD變異等）研究、用血安全檢測(cè)和嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒及流感病毒檢測(cè)等方面,。微流控芯片技術(shù)經(jīng)濟(jì)耐用,，還可及時(shí)簡(jiǎn)便地利用菜單為臨床提供信息。由于它采用多個(gè)單純PCR組合,，可排除多重PCR檢測(cè)時(shí)互相干擾而影響檢測(cè)效率的問(wèn)題,。

二、依賴核酸序列的擴(kuò)增（nucleic acid sequence based amplification,，NASBA）技術(shù)和“分子燈塔”（molecular beacon）技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用

   NASBA技術(shù)主要為RNA直接擴(kuò)增技術(shù)，而“分子燈塔”技術(shù)為RNA擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù),。NASBA技術(shù)在RNA模板（sense RNA）提取后,，經(jīng)過(guò)引物（oligo P1和primer P2）和2次連續(xù)逆轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)，在同溫度條件下進(jìn)入線性擴(kuò)增循環(huán),，產(chǎn)物直接為單鏈反義RNA（anti-sense RNA）,。“分子燈塔”技術(shù)已于前幾年的熒光實(shí)時(shí)定時(shí)檢測(cè)技術(shù)為先導(dǎo)進(jìn)入臨床，其基本原理是核酸雜交反應(yīng)。在同時(shí)標(biāo)記有熒光集團(tuán)（fluorophore）和淬滅集團(tuán)（quencher）的“分子燈塔”探針進(jìn)入靶RNA（anti-sense RNA）生成體系中,，當(dāng)探針與靶RNA有同源序列結(jié)合后,，利用延伸時(shí)RNA聚合酶（T7 RNA polymerase）的外切酶作用，切去淬滅集團(tuán),，使熒光集團(tuán)釋放,，然后進(jìn)行檢測(cè)。
NASBA技術(shù)與逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR檢測(cè)RNA不同,。RT-PCR在檢測(cè)RNA時(shí),，必先利用逆轉(zhuǎn)錄酶形成cDNA，然后利用溫度階梯進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增,，產(chǎn)物為cDNA,，引物次序包含于終產(chǎn)物中。而NASBA技術(shù)可直接擴(kuò)增RNA,，是連續(xù)等溫度擴(kuò)增,，產(chǎn)物為單鏈RNA，引物次序不包含于終產(chǎn)物中,。“分子燈塔”技術(shù)需低溫反應(yīng),，檢測(cè)時(shí)以至少有109目標(biāo)片段為好。而NASBA技術(shù)*反應(yīng)溫度為41℃,，擴(kuò)增后產(chǎn)生1014擴(kuò)增物,，因此，兩項(xiàng)技術(shù)結(jié)合可形成適宜搭配,，達(dá)到的匹配,。

   三、蛋白質(zhì)芯片與表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)

   由蛋白質(zhì)芯片（phroteinChip）和表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜儀組成的表面增強(qiáng)激光解吸離于化飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)（SELDI）,，又稱為蛋白質(zhì)指紋圖譜,。蛋白質(zhì)芯片制備包括：（1）生物原始樣品制備。蛋白質(zhì)經(jīng)親合作用結(jié)合到芯片的化學(xué)或生物位點(diǎn)上,。（2）制備清洗的蛋白質(zhì)芯片,。用水洗去非特異結(jié)合的蛋白質(zhì)和緩沖液中的雜質(zhì)，以消除干擾,。（3）加入能量吸收分子（Energy Absorb Molecule,，EAM）。芯片干燥后,，每個(gè)位點(diǎn)上加能量吸收分子,，與蛋白質(zhì)結(jié)合為混合晶體，以促進(jìn)蛋白質(zhì)在SELDI檢測(cè)中的解吸附和離子化,。SELDI測(cè)定包括：（1）用激光解吸電離的方法將保留在芯片上的蛋白質(zhì)解離出來(lái),。（2）電離的蛋白質(zhì)可通過(guò)表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜地測(cè)定出它們的質(zhì)量,。

    SELDI技術(shù)可觀察到一組蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化，可檢測(cè)到經(jīng)典方法無(wú)法測(cè)定的低豐度的蛋白質(zhì),。蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是近幾年生命科學(xué)領(lǐng)域中已嶄露頭角的新技術(shù),，它正在與各項(xiàng)生物技術(shù)有機(jī)結(jié)合中，擴(kuò)展其應(yīng)用范圍,。目前蛋白質(zhì)芯片與SELDI技術(shù)已廣泛應(yīng)用于癌癥,、老年病、感染性疾病,、心血管病等多種疾病研究,，且成功地發(fā)現(xiàn)了艾滋病的抑制蛋白。美國(guó)FDA和NIH建立了早期檢測(cè)和卵巢癌的血清蛋白質(zhì)指紋圖譜,。在腦脊液中定量檢測(cè)β淀粉樣變蛋白用于早期診斷老年癡呆也取得一定進(jìn)展,，并為設(shè)計(jì)特異性靶向蛋白抑制劑治療藥物提供了可靠依據(jù)。我國(guó)學(xué)者也報(bào)告了該技術(shù)在結(jié)直腸癌篩選的結(jié)果,。雖然,，SELDI技術(shù)創(chuàng)建至今僅4年，臨床應(yīng)用報(bào)告僅見(jiàn)于近2年,，但其在診斷學(xué)應(yīng)用上已顯示出光明的前景,，將給臨床診斷學(xué)帶來(lái)新的希望。

    總而言之,，醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展及其臨床應(yīng)用的廣泛開(kāi)展,，必定為未來(lái)新的診療方法提供可能性，這些技術(shù)也只有在應(yīng)用過(guò)程中才能得到恰當(dāng)?shù)脑u(píng)估和改進(jìn),。檢驗(yàn)界的同行們積極關(guān)心新技術(shù)的出現(xiàn)和參與應(yīng)用與改進(jìn),，定將能拓展出更多的項(xiàng)目應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)工作中。