牛大腸菌群（coliform）試劑盒（ELISA）

使用說明書

貨號: SU-B77108

本試劑盒用于體外定量技術(shù)血清、血漿、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中牛大腸菌群（coliform）的含量,。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被牛大腸菌群（coliform）抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的技術(shù)抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛大腸菌群（coliform）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

樣本處理及要求

1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過ye后于1000g離心20分鐘,，取上清即可技術(shù),，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 -8°C 1000g離心20分鐘,，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘,，取上清即可技術(shù)，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注：標本溶血會影響zui后技術(shù)結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項技術(shù),。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

備注：

1.  標準品濃度依次為：24,、12、6,、3,、1.5、0.75pg/ml

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的技術(shù)范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗,。

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑,。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值,。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射,。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和技術(shù)裝置,。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。

4. 除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的技術(shù)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

實驗結(jié)果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標,，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度,。

試劑盒性能

1. 技術(shù)范圍：0.75pg/ml–24pg/ml。

2. 靈敏度：zui低技術(shù)濃度小于0.1pg/ml,。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。