流式細胞術(shù)檢測細胞周期

1。實驗原理  

     用流式細胞儀檢測細胞周期,，通常用碘化丙啶（propidium iodide,，PI）染細胞核。PI在一定波長的光下發(fā)出熒光,，其強度與DNA含量成正比,。通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數(shù),，可檢測細胞的增殖、凋亡,。

2,。流式細胞儀檢測A549細胞周期步驟  

     收集對數(shù)生長期細胞，計數(shù),，以(1~5)×105/孔接種于6孔板,，置37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)過夜,，使細胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液,，各孔分別加入含有0,、80、400,、2000,、10000 mg/L不同濃度茶氨酸的細胞培養(yǎng)液2 mL/孔，繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng),；每24 h同法換液一次,。每個濃度設(shè)3個重復。  48 h后,，中止培養(yǎng),，胰酶消化后，收集細胞于流式管1000 r/min離心5min,，棄上,，冷PBS洗滌細胞3次，離心去上清,；  一邊震蕩一邊向細胞沉淀中加入70%預冷乙醇混勻,，4℃固定18 h以上；離心,，棄去乙醇上清,，加入預冷的PBS洗沉淀1次，離心去上清,；  加入RNA酶（50 mg/L）10 μL/孔和PI（50 mg/L）300 μL/孔,，震蕩混勻。室溫,、避光反應30 min,；  流式細胞儀進行DNA檢測，用Modifit軟件分析各時相細胞周期的比例,。