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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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人胰腺癌裸小鼠模型

時(shí)間:2022/5/14閱讀:1251
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人胰腺癌裸小鼠模型

 

實(shí)驗(yàn)方法原理

 

          將人胰腺癌細(xì)胞株8988 接種于裸鼠腋窩處皮下,每周測(cè)量腫瘤大小,,第42d 處死小鼠,。腫瘤組織及相關(guān)臟器送病理及電鏡檢查,放射免疫法檢測(cè)相關(guān)抗原,。皮下腫瘤組織細(xì)胞及細(xì)胞株培養(yǎng),,HE 染色。

 

實(shí)驗(yàn)材料         

 

裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌細(xì)胞株8988

 

試劑,、試劑盒


RPMI-1640 *培養(yǎng)基胰酶戊二醛

 

儀器、耗材    

 

CO2 培養(yǎng)箱試管

 

實(shí)驗(yàn)步驟         

 

一,、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

 

裸小鼠BALB/ c nu- nu ,,4周齡,體重1620 g,,雌雄兼?zhèn)洌?/span>SPF 級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng),,恒溫2527 ℃,恒濕45%50% ,,飲用水及食物均經(jīng)滅菌,。

 

二、人胰腺癌細(xì)胞株8988 體外傳代培養(yǎng)

 

1.  將人胰腺癌細(xì)胞株放入含10 %RPMI-1640 *培養(yǎng)基中,,置于37 ℃,、5 %CO2 培養(yǎng)箱中,每2d 換液1次,,23d,,0. 25 %的胰酶消化,一傳傳代培養(yǎng)。

 

2.  待細(xì)胞布滿瓶底時(shí),收集單細(xì)胞懸液,,每只×106 腫瘤細(xì)胞,,0. 2ml ,注射于裸小鼠腋窩處皮下,,建立腫瘤模型,。

 

3.  每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小,按公式V= π/ 6 ×長(zhǎng)×寬×高,,計(jì)算腫瘤大小,,并繪制生長(zhǎng)曲線。

 

三,、血清學(xué)檢測(cè)

 

周時(shí)拔眼球法處死小鼠,,收集血液于試管中,靜置取血清,,檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原及淀粉酶,。

 

四、巨檢

 

1.  處死裸鼠后,,皮下剝離腫瘤,,記錄質(zhì)地、浸潤(rùn),、血供情況,,觀察有無腹腔粘連,各臟器轉(zhuǎn)移狀況,。

 

2.  將腫瘤組織,、肺、肝,、脾,、腸系膜、十二指腸,、胃,、腦等取標(biāo)本置于10 %的福爾馬林固定液中待用。

 

五,、病理學(xué)檢測(cè)

 

上述標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋切片,,HE 染色,光鏡觀察,。

 

六,、超微結(jié)構(gòu)觀察

 

腫瘤組織2. 5 %戊二醛,1 %鋨酸雙固定,,包埋,,超薄切片,,鈾鉛雙重染色,透射電鏡觀察,。

 

七,、鏡檢

 

1.   腫瘤組織細(xì)胞培養(yǎng)及活細(xì)胞觀察:取新鮮裸鼠皮下腫瘤組織,PBS 漂洗次,,剪成1 m3 大小,,0. 25 %的胰酶消化,去除粗大組織后,,制成單細(xì)胞懸液,,置37 ℃、5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,倒置顯微鏡下觀察其形態(tài),、生長(zhǎng)情況等, 并與細(xì)胞株8988 進(jìn)行比較,。

 

2.  細(xì)胞HE 染色及形態(tài)學(xué)觀察:腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞株相同量培養(yǎng)于含有蓋玻片的六孔板中,, 生長(zhǎng)至次融合后,棄培養(yǎng)基,,PBS 次,,2. 5 %戊二醛固定,PBS 次,,HE 染色,,光鏡下觀察比較。


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