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1. 對于貼壁細胞或細胞涂片PBS洗滌一次。
2. 如果細胞貼得不牢,,可以干燥樣品使細胞貼得更牢。
3. 用4%多聚甲醛固定細胞15分鐘,用PBS洗滌一次,。
4. 將切片移入濕盒中加入新鮮配制的3%雙氧水,以去除內(nèi)源性過氧化物酶封閉液,室溫孵育10分鐘,,PBS充分淋洗,;
5. 滴加正常山羊血清封閉液,室溫30分鐘,,甩去多余液體,;
6. 滴加一抗工作液,37℃孵育2h(或4℃過夜),,然后PBS充分淋洗,;
7. 滴加兔/鼠二抗工作液,,室溫孵育1h,PBS充分淋洗,;
8. DAB顯色5-10分鐘,,在顯微鏡下掌握染色程度 ;
9. PBS或自來水沖洗1分鐘 ,;
10. 蘇木精復染3分鐘,,鹽酸酒精分化,反藍;
11. 自來水沖洗1分鐘 脫水,、透明,、封片、鏡檢,。
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