初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng),，是從供體獲取組織后的培養(yǎng)。組織和細(xì)胞剛剛離體,，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化,，具有二倍體遺傳性狀，在供體來(lái)源充分,、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡,、性別）,，在一定程度上能 反  映體內(nèi)狀態(tài)。

 實(shí)驗(yàn)方法原理

 消化培養(yǎng)法

 合成培養(yǎng)基胰蛋白酶消化培養(yǎng)法,，能把組織塊分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,，便于細(xì)胞從培養(yǎng)液中攝取營(yíng)養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物，細(xì)胞能較快地長(zhǎng)成單層,。
  本法尤適用于培養(yǎng)大量組織,，細(xì)胞產(chǎn)量高；但用于經(jīng)常性小量培養(yǎng)工作稍顯繁瑣,，無(wú)菌操作不良時(shí)且易污染,。

  實(shí)驗(yàn)材料

  組織

  試劑、試劑盒

  Hanks  培養(yǎng)液 胰蛋白酶

 儀器,、耗材

  吸管 平皿  培養(yǎng)瓶 燒杯 攪拌器 三角燒杯 眼科剪 眼科鑷 計(jì)數(shù)板

  實(shí)驗(yàn)步驟

  1.  準(zhǔn)備
  取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面,，紫外線消毒20 分鐘；
  2.  布局
  點(diǎn)燃酒精燈（或煤氣燈）,，安裝吸管帽（應(yīng)通過(guò)火焰）,；

  3.  處理組織
   把組織塊置入燒杯中，用Hanks液漂洗2~3 次,，去除血污,；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60 分鐘,；
  4.  剪切
  用眼科剪把組織塊切成2~3 毫米大小的塊（用手術(shù)刀割亦可）,，以便于消化；加入比組織塊總量多30~50 倍的胰蛋白酶液,，然后一并倒入三角燒瓶中,，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞；
  5.  消化
  或用恒溫水浴,，或置入37 ℃溫箱消化均可,，消化中每隔20 分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨茫ㄏ捌恐行柚靡粺o(wú)菌攪棒）,；消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定,；
  6.  分離
  在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩,，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊（必要時(shí)可繼續(xù)進(jìn)行消化）,；低速  （500~1000 轉(zhuǎn)/分）離心消化液5 分鐘，吸出上清,，加入適量含有血清的培養(yǎng)液（如有其它酶或EDTA 等消化,，需用Hanks液洗脫一兩次后,，再加入培養(yǎng)液）；
  7.  計(jì)數(shù)
  用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大,，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中,；對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),，pH 要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色,，如顏色偏黃，說(shuō)膽液體變酸,，可用NaHCO3調(diào)整,；

  8.  培養(yǎng)
  置入36.5 ℃溫箱培養(yǎng)；如用CO2溫箱培養(yǎng),，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞,，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需更換新塞,。