一、背景

    大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運動的高級中樞,。它由初級感覺區(qū),、初級運動區(qū)和聯(lián)合區(qū)三部分構(gòu)成。人類大腦皮層的神經(jīng)細胞約有140億個，面積約2200平方厘米,，主要含有錐體形細胞,、梭形細胞和星形細胞（顆粒細胞）及神經(jīng)纖維。

    體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元作為神經(jīng)科學研究的有力手段,，越來越受到廣大科研工作者的重視,。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞，動物出生后很少分裂,，相對于其它細胞而言,，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長。因此,，體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊,。

二、實驗步驟

1. 無菌條件下,，從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預冷的無鈣,、鎂平衡鹽溶液中；

2.在解剖顯微鏡下,，分離取出胚胎大腦皮層,，除去腦膜，剪碎組織,，加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化10 分鐘,，期間搖晃一次；

3.去掉上清,，加入終止液終止消化,，吹打10-15次，不能有氣泡,，收集上清,；剩余沉淀加入終止液繼續(xù)吹打5-10次；

4.所收集的上清過濾后,，將細胞懸液于4℃1000rpm離心10min ,，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液重懸,；

5.臺盼藍染色計數(shù),，以 3 x 10^4cells/孔種入包被的24孔板，37℃,，5%CO2,，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.每周換液兩次,，每次半量換液,。