C666-1 C666-1細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株

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基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的,，是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)?；蚯贸褪峭ㄟ^(guò)同源重組將外源基因定點(diǎn)整合入靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點(diǎn),，以達(dá)到定點(diǎn)修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù)。本文對(duì)三種基因敲除技術(shù)作比較,，描述它們的優(yōu)缺點(diǎn),。

基于胚胎干細(xì)胞的同源重組技術(shù)

1、優(yōu)勢(shì)：成熟,、可靠,、精細(xì)是目前為止*一個(gè)可以滿足所有要求的打靶技術(shù)

2、局限性：

A 需要ES細(xì)胞,，目前只有小鼠有的ES細(xì)胞,，其它模式動(dòng)物的ESC還不能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用,。

B 周期長(zhǎng)、工作量大,、費(fèi)用相對(duì)比較高

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除模式小鼠

B 條件性基因敲除模式小鼠

C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠

D 基因敲入模式小鼠

E ROSA位點(diǎn)定點(diǎn)轉(zhuǎn)基因

TALEN技術(shù)

1、優(yōu)勢(shì)：基因敲除效率高,，速度快,，可實(shí)現(xiàn)多物種基因敲除

2、局限性：

基因敲入效率較低,，多基因敲除困難,，系統(tǒng)構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜，存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除大/小鼠

B 全基因敲除細(xì)胞系

EGE系統(tǒng)

1,、優(yōu)勢(shì)：基因敲除/敲入效率高，速度快,，可實(shí)現(xiàn)多基因,、多物種基因敲除/敲入，系統(tǒng)構(gòu)建簡(jiǎn)單

2,、局限性：

存在脫靶風(fēng)險(xiǎn),，但通過(guò)選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率，In vivo脫靶可通過(guò)傳代去除.

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠

B 全基因/條件性報(bào)告基因敲除/敲入大/小鼠

C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建

D 細(xì)胞系敲除/敲入

C666-1 C666-1細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株--相關(guān)同類產(chǎn)品：5637細(xì)胞,，MHCC97-L細(xì)胞，2V6.11細(xì)胞,，HK-2細(xì)胞,，A549細(xì)胞，HL-60細(xì)胞,，BMSC細(xì)胞,，BRL 3A細(xì)胞，Caco-2細(xì)胞,，COV434細(xì)胞,，F(xiàn)RhK-4細(xì)胞，GES-1細(xì)胞,，SKOV3細(xì)胞,，SKOV3/DDP細(xì)胞，SK-N-SH細(xì)胞,，ZR-75-30細(xì)胞,，PC-9細(xì)胞，CHO細(xì)胞,，A549細(xì)胞,，MKN-5細(xì)胞,，L-02細(xì)胞，DH82細(xì)胞,，A-431細(xì)胞,，BGC-823細(xì)胞，BV2細(xì)胞,，HT-22細(xì)胞,，CCRF-CEM細(xì)胞，MC38細(xì)胞,，CNE-1細(xì)胞,，CTLL-2細(xì)胞，T2細(xì)胞,，Bend.3細(xì)胞等,，凡購(gòu)買我公司任何一株細(xì)胞，我公司免費(fèi)贈(zèng)送德國(guó)SERANA*胎牛血清(南美源,，優(yōu)等級(jí)別)試用裝30-50ML一瓶,，更有禮品相送!

研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,。胎牛血清使用錯(cuò)誤或胎牛血清的品質(zhì)不佳,。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,，加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤,。細(xì)胞置于–80℃太久,。

研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少， 大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,，造成細(xì)胞的物理性損傷,， 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。

乾思生物為您提供細(xì)胞培養(yǎng)技巧以及操作注意事項(xiàng)，發(fā)貨時(shí)隨貨都有詳細(xì)說(shuō)明,，發(fā)貨前會(huì)告知老師細(xì)胞培養(yǎng)條件以及適合哪款血清培養(yǎng)。

 快速識(shí)別與處理常見(jiàn)細(xì)胞污染的招術(shù)：

1,、細(xì)菌：

識(shí)別：細(xì)菌在顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形,，有球形,，鏈形,，桿形等。大家不必深究,。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃,，培養(yǎng)瓶頂部有一層細(xì)沙一樣的東西。就知道大事不好啦,。

處理：可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理,。可以用四環(huán)素,，慶大霉素,，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL,。其實(shí),，毛毛蟲(chóng)說(shuō)句實(shí)話，一旦發(fā)生污染,，就已經(jīng)大勢(shì)已去了,。如果細(xì)胞不是特別特別珍貴的話，還是趁早扔了,，重起爐灶吧,。所以，zui重要的還是防范于未然,。做好培養(yǎng)間,，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作,。在操作的時(shí)候,，嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作規(guī)范。

2,、霉菌：

識(shí)別：因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的,，所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn)，等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過(guò)晚了,。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),，鏡下可見(jiàn)呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，如同風(fēng)中柳絮,。細(xì)胞仍可生長(zhǎng),，但時(shí)間一長(zhǎng)，細(xì)胞的狀態(tài)就變差,。

處理：細(xì)胞一旦被霉菌污染,，很難挽救，兩性霉素B或制霉菌素都于事無(wú)補(bǔ),，建議果斷舍棄該污染細(xì)胞,，將環(huán)境*消毒,。

采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍,。把水盤(pán)里加上飽和量的硫酸銅,。

3、支原體：

識(shí)別：多為多邊形,，培養(yǎng)液一般會(huì)變渾濁,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯,，只是和你一起慢慢變老,。支原體污染后，可影響所有的細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。

處理：沒(méi)有什么好處理的,。直接扔了吧。污染到其他的細(xì)胞就虧大發(fā)了,。還是那句話,，預(yù)防為主。

4,、黑蛟蟲(chóng)：

識(shí)別：誰(shuí)都不知道所謂的“黑膠蟲(chóng)”是什么東西,。據(jù)說(shuō)是納米級(jí)的細(xì)菌。低倍下為黑色點(diǎn)狀,，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去,。培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響,。但是如果太多了,，也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

處理：因?yàn)楦静恢肋@是什么物種,，所以也談不上什么處理方式,。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度,，以提高細(xì)胞的生存率,。

5、真菌：

識(shí)別：真菌污染和霉菌污染差不多,。一般培養(yǎng)液清亮,，所以很難早期發(fā)現(xiàn)。鏡下有時(shí)候象絲狀，有時(shí)候象珊瑚狀,。慢慢地會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。這個(gè)時(shí)候,，已經(jīng)晚了,，細(xì)胞很難救活了。

處理：同霉菌污染一樣,，沒(méi)有什么好處理的,，直接扔了吧。然后*消毒滅菌培養(yǎng)間,，CO2孵箱,，器皿和培養(yǎng)液。

細(xì)胞種類較多,，本展臺(tái)無(wú)法一一體現(xiàn),，以上是我司部分產(chǎn)品，若沒(méi)有看到您需要的細(xì)胞,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?，咨詢?/span>