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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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C666-1 C666-1細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株

時(shí)間:2016-7-1閱讀:862
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C666-1 C666-1細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株

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基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的,,是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)?;蚯贸褪峭ㄟ^(guò)同源重組將外源基因定點(diǎn)整合入靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點(diǎn),,以達(dá)到定點(diǎn)修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù)。本文對(duì)三種基因敲除技術(shù)作比較,,描述它們的優(yōu)缺點(diǎn),。

基于胚胎干細(xì)胞的同源重組技術(shù)

1、優(yōu)勢(shì):成熟,、可靠,、精細(xì)是目前為止*一個(gè)可以滿足所有要求的打靶技術(shù)

2、局限性:

A 需要ES細(xì)胞,,目前只有小鼠有的ES細(xì)胞,,其它模式動(dòng)物的ESC還不能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用,。

B 周期長(zhǎng)、工作量大,、費(fèi)用相對(duì)比較高

3,、可提供服務(wù)類型:

A 全基因敲除模式小鼠

B 條件性基因敲除模式小鼠

C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠

D 基因敲入模式小鼠

E ROSA位點(diǎn)定點(diǎn)轉(zhuǎn)基因

TALEN技術(shù)

1、優(yōu)勢(shì):基因敲除效率高,,速度快,,可實(shí)現(xiàn)多物種基因敲除

2、局限性:

基因敲入效率較低,,多基因敲除困難,,系統(tǒng)構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜,存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)

3,、可提供服務(wù)類型:

A 全基因敲除大/小鼠

B 全基因敲除細(xì)胞系

EGE系統(tǒng)

1,、優(yōu)勢(shì):基因敲除/敲入效率高,速度快,,可實(shí)現(xiàn)多基因,、多物種基因敲除/敲入,系統(tǒng)構(gòu)建簡(jiǎn)單

2,、局限性:

存在脫靶風(fēng)險(xiǎn),,但通過(guò)選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率,In vivo脫靶可通過(guò)傳代去除.

3,、可提供服務(wù)類型:

A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠

B 全基因/條件性報(bào)告基因敲除/敲入大/小鼠

C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建

D 細(xì)胞系敲除/敲入


 

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研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,。胎牛血清使用錯(cuò)誤或胎牛血清的品質(zhì)不佳,。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,,加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤,。細(xì)胞置于–80℃太久,。

研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少, 大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,,造成細(xì)胞的物理性損傷,, 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。

乾思生物為您提供細(xì)胞培養(yǎng)技巧以及操作注意事項(xiàng),發(fā)貨時(shí)隨貨都有詳細(xì)說(shuō)明,,發(fā)貨前會(huì)告知老師細(xì)胞培養(yǎng)條件以及適合哪款血清培養(yǎng)。

 快速識(shí)別與處理常見(jiàn)細(xì)胞污染的招術(shù):

1,、細(xì)菌:

識(shí)別:細(xì)菌在顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,,有球形,,鏈形,,桿形等。大家不必深究,。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃,,培養(yǎng)瓶頂部有一層細(xì)沙一樣的東西。就知道大事不好啦,。

處理:可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理,。可以用四環(huán)素,,慶大霉素,,或者鏈霉素,前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL,。其實(shí),,毛毛蟲(chóng)說(shuō)句實(shí)話,一旦發(fā)生污染,,就已經(jīng)大勢(shì)已去了,。如果細(xì)胞不是特別特別珍貴的話,還是趁早扔了,,重起爐灶吧,。所以,zui重要的還是防范于未然,。做好培養(yǎng)間,,CO2孵箱,器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作,。在操作的時(shí)候,,嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作規(guī)范。

2,、霉菌:

識(shí)別:因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的,,所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn),等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過(guò)晚了,。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),,鏡下可見(jiàn)呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,如同風(fēng)中柳絮,。細(xì)胞仍可生長(zhǎng),,但時(shí)間一長(zhǎng),細(xì)胞的狀態(tài)就變差,。

處理:細(xì)胞一旦被霉菌污染,,很難挽救,兩性霉素B或制霉菌素都于事無(wú)補(bǔ),,建議果斷舍棄該污染細(xì)胞,,將環(huán)境*消毒,。

采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍,。把水盤(pán)里加上飽和量的硫酸銅,。

3、支原體:

識(shí)別:多為多邊形,,培養(yǎng)液一般會(huì)變渾濁,。支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,,只是和你一起慢慢變老,。支原體污染后,可影響所有的細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,,必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。

處理:沒(méi)有什么好處理的,。直接扔了吧。污染到其他的細(xì)胞就虧大發(fā)了,。還是那句話,,預(yù)防為主。

4,、黑蛟蟲(chóng):

識(shí)別:誰(shuí)都不知道所謂的“黑膠蟲(chóng)”是什么東西,。據(jù)說(shuō)是納米級(jí)的細(xì)菌。低倍下為黑色點(diǎn)狀,,高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去,。培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會(huì)太影響,。但是如果太多了,,也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

處理:因?yàn)楦静恢肋@是什么物種,,所以也談不上什么處理方式,。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,可以增加細(xì)胞的種板密度,,以提高細(xì)胞的生存率,。

5、真菌:

識(shí)別:真菌污染和霉菌污染差不多,。一般培養(yǎng)液清亮,,所以很難早期發(fā)現(xiàn)。鏡下有時(shí)候象絲狀,有時(shí)候象珊瑚狀,。慢慢地會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。這個(gè)時(shí)候,,已經(jīng)晚了,,細(xì)胞很難救活了。

處理:同霉菌污染一樣,,沒(méi)有什么好處理的,,直接扔了吧。然后*消毒滅菌培養(yǎng)間,,CO2孵箱,,器皿和培養(yǎng)液。

細(xì)胞種類較多,,本展臺(tái)無(wú)法一一體現(xiàn),,以上是我司部分產(chǎn)品,若沒(méi)有看到您需要的細(xì)胞,,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?,咨詢?/span>

 

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