C4-2 C4-2細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株

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基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的，是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù),?；蚯贸褪峭ㄟ^同源重組將外源基因定點(diǎn)整合入靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點(diǎn)，以達(dá)到定點(diǎn)修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù),。本文對(duì)三種基因敲除技術(shù)作比較,，描述它們的優(yōu)缺點(diǎn)。

基于胚胎干細(xì)胞的同源重組技術(shù)

1,、優(yōu)勢：成熟,、可靠、精細(xì)是目前為止*一個(gè)可以滿足所有要求的打靶技術(shù)

2,、局限性：

A 需要ES細(xì)胞,，目前只有小鼠有的ES細(xì)胞，其它模式動(dòng)物的ESC還不能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用,。

B 周期長,、工作量大、費(fèi)用相對(duì)比較高

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除模式小鼠

B 條件性基因敲除模式小鼠

C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠

D 基因敲入模式小鼠

E ROSA位點(diǎn)定點(diǎn)轉(zhuǎn)基因

TALEN技術(shù)

1,、優(yōu)勢：基因敲除效率高，速度快,，可實(shí)現(xiàn)多物種基因敲除

2,、局限性：

基因敲入效率較低，多基因敲除困難,，系統(tǒng)構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜,，存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)

3、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除大/小鼠

B 全基因敲除細(xì)胞系

EGE系統(tǒng)

1,、優(yōu)勢：基因敲除/敲入效率高,，速度快，可實(shí)現(xiàn)多基因,、多物種基因敲除/敲入,，系統(tǒng)構(gòu)建簡單

2,、局限性：

存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)，但通過選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率,，In vivo脫靶可通過傳代去除.

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠

B 全基因/條件性報(bào)告基因敲除/敲入大/小鼠

C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建

D 細(xì)胞系敲除/敲入

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研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。胎牛血清使用錯(cuò)誤或胎牛血清的品質(zhì)不佳,。解凍過程錯(cuò)誤,。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞,。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80℃太久,。

研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,， 大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷,， 以及細(xì)胞流失,。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。

乾思生物為您提供細(xì)胞培養(yǎng)技巧以及操作注意事項(xiàng),，發(fā)貨時(shí)隨貨都有詳細(xì)說明，發(fā)貨前會(huì)告知老師細(xì)胞培養(yǎng)條件以及適合哪款血清培養(yǎng),。

 快速識(shí)別與處理常見細(xì)胞污染的招術(shù)：

1,、細(xì)菌：

識(shí)別：細(xì)菌在顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同,，可有不同的外形,，有球形，鏈形,，桿形等,。大家不必深究。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃,，培養(yǎng)瓶頂部有一層細(xì)沙一樣的東西,。就知道大事不好啦。

處理：可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理,?？梢杂盟沫h(huán)素，慶大霉素,，或者鏈霉素,，前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。其實(shí),，毛毛蟲說句實(shí)話,，一旦發(fā)生污染，就已經(jīng)大勢已去了。如果細(xì)胞不是特別特別珍貴的話,，還是趁早扔了,，重起爐灶吧。所以,，zui重要的還是防范于未然,。做好培養(yǎng)間，CO2孵箱,，器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作,。在操作的時(shí)候，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范,。

2,、霉菌：

識(shí)別：因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的，所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn),，等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過晚了,。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,，如同風(fēng)中柳絮,。細(xì)胞仍可生長，但時(shí)間一長,，細(xì)胞的狀態(tài)就變差,。

處理：細(xì)胞一旦被霉菌污染，很難挽救,，兩性霉素B或制霉菌素都于事無補(bǔ),，建議果斷舍棄該污染細(xì)胞，將環(huán)境*消毒,。

采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱,。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤里加上飽和量的硫酸銅,。

3,、支原體：

識(shí)別：多為多邊形，培養(yǎng)液一般會(huì)變渾濁,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯,，只是和你一起慢慢變老,。支原體污染后，可影響所有的細(xì)胞生長參數(shù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。

處理：沒有什么好處理的,。直接扔了吧,。污染到其他的細(xì)胞就虧大發(fā)了。還是那句話,，預(yù)防為主,。

4、黑蛟蟲：

識(shí)別：誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西,。據(jù)說是納米級(jí)的細(xì)菌,。低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,。培養(yǎng)液也是不渾的,，一般不會(huì)太影響。但是如果太多了,，也會(huì)影響細(xì)胞生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

處理：因?yàn)楦静恢肋@是什么物種，所以也談不上什么處理方式,。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率,。

5,、真菌：

識(shí)別：真菌污染和霉菌污染差不多。一般培養(yǎng)液清亮,，所以很難早期發(fā)現(xiàn),。鏡下有時(shí)候象絲狀，有時(shí)候象珊瑚狀,。慢慢地會(huì)長出很細(xì)的黑色絲狀物,。這個(gè)時(shí)候，已經(jīng)晚了,，細(xì)胞很難救活了,。

處理：同霉菌污染一樣，沒有什么好處理的,，直接扔了吧,。然后*消毒滅菌培養(yǎng)間，CO2孵箱,，器皿和培養(yǎng)液,。

細(xì)胞種類較多，本展臺(tái)無法一一體現(xiàn),，以上是我司部分產(chǎn)品,，若沒有看到您需要的細(xì)胞，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉茫稍儭?/span>