關(guān)鍵詞:流式分選實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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流式分選實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
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產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒?yàn)流程：
1 作用原理：
對實(shí)體組織分散的作用原理主要有3方面：① 可以破壞組織間的膠原纖維,、彈性纖維等,；②可以水解組織間的粘多糖等物質(zhì),；③可以水解組織細(xì)胞間的緊密聯(lián)結(jié)裝置的蛋白質(zhì)物質(zhì)。酶消化法是實(shí)體瘤,、培養(yǎng)細(xì)胞分散為單細(xì)胞的主要方法之一,。常用的酶類試劑有：蛋白酶類——胃蛋白酶、木瓜蛋白酶,、鏈酶蛋白酶和中性蛋白酶等,，都能解離組織中的細(xì)胞。胰蛋白酶能水解脂鍵和肽鍵,；膠原酶能降解幾種分子類型的膠原,；溶菌酶能水解糖蛋白和肽的糖苷鍵；彈性蛋白酶能消化連接組織的糖蛋白和彈性蛋白的纖維,。不同酶對細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間不同組分有特異作用,，可根據(jù)分散組織類型來確定使用的酶類。
2 注意事項(xiàng)：
① 酶需要溶解于適當(dāng)?shù)娜芤褐?，而這些溶液不致于造成酶效價(jià)降低,；②要注意酶的使用濃度和消化時(shí)間；③要注意酶活性的PH值,。如胃蛋白酶在堿性環(huán)境中失去活性,，胰蛋白酶在中性溶劑中活性不佳等；④ 要隨時(shí)注意影響酶活性的其它因素,，如酶的生產(chǎn)批號(hào)等,。
化學(xué)處理法是將組織細(xì)胞間起粘著作用的鈣鎂離子置換出來，從而使細(xì)胞分散開來,。
試劑的配制
① 0.2%EDTA配制：稱EDTA 0.2g,，加入Hankˊs液100ml，封裝高壓消毒,。置0℃-4℃保存,；
② 胰酶加EDTA配制：胰酶0.25g 加PBS（pH7.0）200ml，濃度0.125%,，EDTA 0.2g加PBS（pH7.0）100ml,，濃度0.2%。各取40ml混合,，分裝置冰箱保存,，用時(shí)過濾即可使用。
實(shí)驗(yàn)方法
① 將組織切成薄片,，置入試管中,；
② 首先加入EDTA液5ml，室溫下0.5h，離心棄之,；
③ 再加入胰酶-EDTA液5ml,。在37℃恒溫水浴振蕩器內(nèi)30min；
④ 用300目尼龍網(wǎng)過濾,，離心沉淀1000prm,，5min。再以生理鹽水洗2-3次,；
⑤ 細(xì)胞固定或低溫保存?zhèn)溆谩?br>機(jī)械法分散實(shí)體組織包括：用手術(shù)剪刀剪碎或者用鋒利的解剖刀剁碎組織,，用勻漿器勻漿，再用細(xì)注射針頭抽吸細(xì)胞或用300目尼龍網(wǎng)濾出單細(xì)胞懸液,；采用搓網(wǎng)法也能獲得大量細(xì)胞,。機(jī)械法易造成細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)塊，所以機(jī)械法常與其它方法配合使用,。
1 剪碎法：
① 將組織塊放入平皿中,，加入少量生理鹽水；
② 用剪刀將組織剪至勻漿狀,；
③ 加入10ml生理鹽水,；
④ 用吸管吸取組織勻漿,，先以100目尼龍網(wǎng)過濾到試管中,；
⑤ 離心沉淀1000prm,3-5min，再用生理鹽水洗3遍,，每次以低速（500-800prm）短時(shí)離心沉淀去除細(xì)胞碎片,；
⑥ 以300目尼龍網(wǎng)濾去細(xì)胞團(tuán)塊；
⑦ 細(xì)胞用固定液固定或低溫保存?zhèn)溆谩?br>2 網(wǎng)搓法
① 將100目,，300目尼龍網(wǎng)扎在小燒杯上,；
② 把剪碎的的組織放在網(wǎng)上，以眼科鑷子輕輕搓組織塊,，邊搓邊加生理鹽水沖洗,，直到將組織搓完；
③ 收集細(xì)胞懸液,，離心沉淀500-800prm,，2分鐘；
④ 固定細(xì)胞或低溫保存?zhèn)溆谩?br>3 研磨法
準(zhǔn)備一只70ml研磨器,。
① 先將組織剪成1-2mm3大小組織塊,；
② 放入組織研磨器中加入1-2ml生理鹽水；
③ 轉(zhuǎn)動(dòng)研棒,，研至勻漿,；
④ 加入10ml生理鹽水，沖洗研磨器；
⑤ 收集細(xì)胞懸液,，并經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾,，離心沉淀500-800 prm，1-2 min,，再以生理鹽水洗3 遍,，離心沉淀；
⑥ 固定或低溫保存細(xì)胞懸液,，備用,。