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上海乾思生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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抗體定制服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

時(shí)間:2015/7/1閱讀:651
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關(guān)鍵詞:抗體定制服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
抗體檢測(cè)服務(wù)
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))
Dot Blot(斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn))
Western Blot(免疫印跡實(shí)驗(yàn))
IHC (免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn))
抗體標(biāo)記服務(wù)
HRP(辣根過氧化物酶)
Biotin(生物素)
實(shí)驗(yàn)流程:
第0天:          進(jìn)行*次免疫
第1-10天:      加強(qiáng)免疫
第14天:        ELISA測(cè)定血清滴度
第18天:        融合
第36天:        克隆初篩
第40天:        克隆復(fù)篩
第46天:        克隆擴(kuò)增,,提供培養(yǎng)上清

制備     提供多肽序列,或Genbank號(hào),,公司負(fù)責(zé)合成多肽,,偶聯(lián)KLH及偶聯(lián)檢測(cè)載體BSA(OVA)     2周     多肽合成,10mg純度>95%     ¥128/A      
偶聯(lián)KLH 2mg     ¥1280      
偶聯(lián)BSA(或者OVA) 2mg     ¥780      
客戶只提供Genbank號(hào)     4周     構(gòu)建含有客戶認(rèn)可抗原序列的原核表達(dá)載體,,進(jìn)行蛋白表達(dá)純化,,制備可供免疫的抗原     ¥4000      
客戶提供能正常表達(dá)的菌株     2周     進(jìn)行表達(dá)、純化制備免疫抗原     ¥2000      
客戶選擇真核表達(dá)     4周     構(gòu)建含有Flag標(biāo)簽的真核表達(dá)載體,,293細(xì)胞表達(dá)目的抗原,,用偶聯(lián)Flag單抗的beads親和純化目的融合蛋白作為抗原     詢價(jià)      
提取天然蛋白     2周     提取天然蛋白zui為抗原     詢價(jià)      
免疫     三次免疫后(效價(jià)達(dá)不到融合要求繼續(xù)免疫)測(cè)尾血效價(jià)     5周     免疫5只Bablc小鼠,免疫量50ug/只,zui終達(dá)到融合效價(jià)>1:10000     ¥1000      
加強(qiáng)
免疫     融合前3-5天加強(qiáng)免疫     1天     蛋白透析,,無佐劑50ug/只     ¥50      
融合     PEG1450 (sigmaP7306)
HAT(Invitrogen 21060017 )血清(Hyclone SH30084.03 )     1天     取脾臟分離成單細(xì)胞與對(duì)數(shù)期的SP2/0按5:1混合,,進(jìn)行細(xì)胞融合,20%胎牛血清,,HAT選擇培養(yǎng)基,,鋪10塊96孔板     ¥5000      
上清
檢測(cè)     融合7天后,,ELISA檢測(cè),用檢測(cè)抗原包被ELISA板,,二抗anti-mouse HRP,,TMB顯色     1天     陰性(正常培養(yǎng)基)OD<0.1陽性O(shè)D>0.5視為陽性孔     ¥2000      
亞克隆     對(duì)陽性孔采用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆直到含有細(xì)胞的所有孔均為陽性     4周     ELISA檢測(cè)挑選OD值高的細(xì)胞孔,進(jìn)行后續(xù)亞克隆直到含有細(xì)胞的所有孔均為陽性     ¥8000      
定株     陽性穩(wěn)定的孔進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)     1周     擴(kuò)大培養(yǎng)上清,,按客戶要求進(jìn)行功能檢測(cè)(WB/ELISA/IHC),,滿足客戶要求后,將應(yīng)客戶要求交付細(xì)胞(每株細(xì)胞2管)     ¥5000      
腹水     細(xì)胞株生產(chǎn)10mL腹水     1周     離心后10mL腹水     ¥2000      
亞型     應(yīng)客戶要求測(cè)定細(xì)胞株亞型     1周     采用(Sigma ISO2)測(cè)定亞型     ¥2000      
純化     ProteinA 或G純化10mL腹水     1周     根據(jù)亞型選擇ProteinA 或G     ¥2000      
配對(duì)     純化后的抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)     3周     確定不同克隆之間是否配對(duì)     詢價(jià)      
標(biāo)記     FITC/HRP/BIOTIN/AP等     1周     應(yīng)客戶要求對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記     詢價(jià)      

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