基因甲基化檢測|實驗技術(shù)服務(wù)

時間：2015/7/1閱讀：258

關(guān)鍵詞:基因甲基化檢測|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌基因甲基化檢測|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
基因甲基化檢測|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>DNA甲基化是zui早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?'-甲基胞嘧啶,。DNA甲基化通常抑制基因表達,，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控,。
檢測程序
1.甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,，MSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,，而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設(shè)計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR,。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,，則說明該位點存在甲基化;反之,，說明被檢測的位點不存在甲基化。
2.亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,，BSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變,。隨后設(shè)計BSP引物進行PCR,，在擴增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，zui后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法,。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序,，可以提高測序成功率，這種方法稱為BSP-克隆測序法,。
3.高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting,，HRM)
在非CpG島位置設(shè)計一對針對亞硫酸氫鹽修飾后的DNA雙鏈的引物，這對引物中間的片段包含感興趣的CpG島,。若這些CpG島發(fā)生了甲基化,，用亞硫酸氫鹽處理后，未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴增后轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變,，樣品中的GC含量發(fā)生改變,，從而導(dǎo)致熔解溫度的變化.
送樣要求
細胞(≥106 個)、組織(≥300mg),、血液(≥1ml),、血清(≥1.5ml)等樣品材料，基因組DNA(體積≥20μl,，濃度≥50 ng/μl),。
DNA甲基化的位點與程度的實驗方法有三類：
（1）（M SREs）利用對甲基化堿基敏感的限制性內(nèi)切酶。該酶不能切割甲基化的堿基位點,，從而產(chǎn)生片段差異,，電泳后，根據(jù)片段與量的差異找到甲基化位點與甲基化程度,，
（2）另一類是利用將沒有甲基化的C變?yōu)槠渌鼔A基或其它物質(zhì),，而甲基化的C不會發(fā)生相應(yīng)變化來識別甲基化位點。甲基化特異的PCR (M ethylation-specific PCR,MSP)是較常用的方法,。
（3）一種通過合成方法進行序列分析的方法,，它通過核苷酸和模板結(jié)合后釋放的焦磷酸引發(fā)酶級聯(lián)反應(yīng)，促使熒光素發(fā)光并進行檢測,，Pyrosequencing技術(shù)是近年一種全新的技術(shù),，這項技術(shù)曾經(jīng)被用作單核苷酸多態(tài)性（SNP）的基因型和單倍型的檢測，以及細菌和病毒的鑒定和分型研究,。這項技術(shù)的一個主要特點是在Pyrogarm?軟件上顯示的峰值高度來自于序列分析的原始數(shù)據(jù),，通過峰值的高度可以的檢測混合DNA模板中等位基因的頻率，這種方法同樣可以用于石蠟包埋的組織,，并且具有較高的重復(fù)性和性,。

基因甲基化檢測|實驗技術(shù)服務(wù)

會員登錄

收藏該商鋪

提示