Western Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

時間：2015/7/1閱讀：249

關(guān)鍵詞:Western Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌Western Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
Western Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(western blot),，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法,。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù),。免疫印跡(western blot)常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析,。
服務(wù)基本流程:
1. 蛋白提取和定量（如果提供蛋白樣品,，則直接電泳預(yù)實驗檢測抗體特異性）；
2. SDS-PAGE 10-15% 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,；
3. 轉(zhuǎn)膜（PVDF膜）,；
4. 封閉（5%脫脂奶粉）；
5. 一抗孵育（其中內(nèi)參基因為Tubulin或HistoneH3.1）,；
6. 二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成實驗無法繼續(xù),，則收相關(guān)預(yù)實驗費用）；
7. 顯色（ECL）,；
8. 曝光,、洗片、灰度分析；
服務(wù)報告內(nèi)容:
蛋白濃度,，膠片,，膜,，以及灰度分析（如果需要）及實驗報告
1,蛋白質(zhì)抽提
實驗對象為組織樣品,，取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）,，勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）,。
實驗對象為細胞樣品,，每份樣品取1×106～1×107細胞,，PBS清洗細胞,，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）,。
2. 蛋白質(zhì)定量：按BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作,，測定樣品濃度。
3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預(yù)染蛋白marker分別上樣,，標準加進*個孔中,，電泳分離蛋白。
4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白轉(zhuǎn)移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層,，30mA恒流條件下,，4°C轉(zhuǎn)移。
5. western blot膜的封閉和抗體孵育
膜在5％脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結(jié)合,。
封閉過的膜加入一抗室溫孵育1.5小時,，抗原抗體結(jié)合。
加入HRP標記的二抗體以結(jié)合一抗,，室溫孵育膜1小時,。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。
6. western blot結(jié)果檢測：化學發(fā)光法檢測,，膜與化學發(fā)光底物孵育,，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件,，并用GIS1000分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數(shù)字化。
7. western blot數(shù)據(jù)分析：目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參GAPDH/Actin的灰度值以校正誤差,，所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對含量,。
8. 提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結(jié)果的相關(guān)數(shù)據(jù),。

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