關(guān)鍵詞:IP和Co-IP服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌IP和Co-IP服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
IP和Co-IP服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn),。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）可以：（1）測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；（2）確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,；（3）分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物,。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法,。
其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái),。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,，beads上的proreinA就能吸附抗原達(dá)到精制的目的,。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。
免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái),。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái),。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
具體操作：
收獲細(xì)胞,，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）,，冰上裂解30min, 細(xì)胞裂解液于4°c,， zui大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清；
取少量裂解液以備western blot分析,，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液,，4°c緩慢搖晃孵育；
取10μl protein a 瓊脂糖珠,，用適量裂解緩沖液洗3 次,，每次3,000 rpm離心3 min；
將預(yù)處理過(guò)的10μl protein a 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育的細(xì)胞裂解液中4°c緩慢搖晃孵育2-4h,，使抗體與protein a瓊脂糖珠偶連,；
免疫沉淀反應(yīng)后，在4°c 以3,000 rpm 速度離心3 min,，將瓊脂糖珠離心至管底,；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次,；zui后加入15μl的2×sds 上樣緩沖液,，沸水煮5分鐘；
sds-page, western blotting或質(zhì)譜儀分析,。
通過(guò)免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白 
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細(xì)胞,。刮去每塊板上的細(xì)胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中；
2．將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,，在微量離心機(jī)上4℃以zui大速度離心15 ,；
3．收集上清（約30 ml）并加入30 μg的適當(dāng)抗體，4℃搖動(dòng)免疫沉淀物1 h,；
4．加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液，4℃搖動(dòng)免疫沉淀物30 min,；
5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,，再重復(fù)洗5次。zui后,，用NETN洗一次,；
6．吸出混合物的液體部分。加入800 μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,，煮沸4 min
7．將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中,，在10 mA的恒定電流下電泳；
8．通過(guò)考馬斯亮藍(lán)染色觀察蛋白質(zhì)泳帶,；
9．從膠上切下目標(biāo)帶,，將其放到微量離心管中，用1 ml 50%乙腈洗兩次,，每次3 min,；
10． 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),，再將肽電洗脫；
11． 通過(guò)窄孔液相色譜分離肽,。將收集的肽在ABI 477A或494A機(jī)器上進(jìn)行自動(dòng)Edman降解測(cè)序,。