關鍵詞:IP和Co-IP服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌IP和Co-IP服務|實驗技術服務原裝，質(zhì)量保證,*。
IP和Co-IP服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗,。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）可以：（1）測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；（2）確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,；（3）分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法,。
其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的proreinA預先結(jié)合固化在argarose的beads上,，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后,，beads上的proreinA就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。
免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法,。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時,，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來,。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
具體操作：
收獲細胞,，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）,，冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°c， zui大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清,；
取少量裂解液以備western blot分析,，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°c緩慢搖晃孵育,；
取10μl protein a 瓊脂糖珠,，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3,000 rpm離心3 min,；
將預處理過的10μl protein a 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育的細胞裂解液中4°c緩慢搖晃孵育2-4h,，使抗體與protein a瓊脂糖珠偶連；
免疫沉淀反應后,，在4°c 以3,000 rpm 速度離心3 min,，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去,，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次,；zui后加入15μl的2×sds 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘,；
sds-page, western blotting或質(zhì)譜儀分析,。
通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白 
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中,；
2．將每毫升細胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,，在微量離心機上4℃以zui大速度離心15 ；
3．收集上清（約30 ml）并加入30 μg的適當抗體,，4℃搖動免疫沉淀物1 h,；
4．加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液，4℃搖動免疫沉淀物30 min,；
5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,，再重復洗5次。zui后,，用NETN洗一次,；
6．吸出混合物的液體部分。加入800 μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,，煮沸4 min
7．將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中,，在10 mA的恒定電流下電泳；
8．通過考馬斯亮藍染色觀察蛋白質(zhì)泳帶；
9．從膠上切下目標帶,，將其放到微量離心管中,，用1 ml 50%乙腈洗兩次，每次3 min,；
10． 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),，再將肽電洗脫；
11． 通過窄孔液相色譜分離肽,。將收集的肽在ABI 477A或494A機器上進行自動Edman降解測序,。