關(guān)鍵詞:ELISA即酶聯(lián)免疫吸附劑測定技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌ELISA即酶聯(lián)免疫吸附劑測定技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附劑測定技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面,，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒?yàn)流程：
ELISA可用于測定抗原,，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體,，②酶標(biāo)記的抗原或抗體,，③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件,，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法,。
（一）間接法測抗體
1．酶標(biāo)抗抗體工作濃度的選擇
（1）用100ng/ml人IgG進(jìn)行包被，洗滌,。
（2）將酶標(biāo)抗人IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中,，保溫、洗滌,。
（3）加底物顯色,。加酸終止反應(yīng)后，讀取吸亮度（A）,，繪制曲線如圖15-10,。讀取A值在1.0時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度，作為酶標(biāo)抗體的工作濃度,。該酶標(biāo)抗人IgG的工作濃度應(yīng)為1/1600,。
2．棋盤滴定法選擇包被抗原工作濃度
（1）用包被液將抗原作一系列稀釋后進(jìn)行包被，洗滌,。
（2）將強(qiáng)陽性參考血清,、弱陽性參考血清和陰性參考血清用稀釋液作1:100稀釋，加樣,，保溫,，洗滌。
（3）加按工作濃度稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,，保溫,，洗滌。
（4）加底物顯色,。加酸終止反應(yīng)后讀取A值,。
夾心ELISA包被抗體和酶標(biāo)抗體工作濃度的選擇
（1）抗體免疫球蛋白用包被緩沖液稀釋至蛋白濃度為10,、1和0.1μg/ml，分別在ELISA板上進(jìn)行包被,，每一濃度包括三個(gè)縱行,，洗滌。
（2）在一個(gè)橫行各包被孔中加入強(qiáng)陽性抗原液,，另一橫行加入弱陽性抗原液,，第三橫行加入陰性對(duì)照液，保溫,，洗滌,。
（3）將酶標(biāo)抗體用稀釋液稀釋成三個(gè)濃度，例如1:1000,、1:5000和1:25000,。分別加入每一包被濃度的一個(gè)縱行中，保溫,，洗滌,。
（4）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后,，讀取A值,。
（5）以強(qiáng)陽性抗原的A值在0.8左右、陰性參考的A值小于0.1的條件作zui適條件,，據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度,。從表15-2可看出包被抗體濃度可選用1μg/ml，酶標(biāo)抗體的稀釋度可選為1:5000,。為了進(jìn)一步節(jié)省試劑,，可以此濃度為基點(diǎn)，縮小間距再做進(jìn)一步的棋盤滴定,。
（5）選擇強(qiáng)陽性參考血清的A值為0.8左右,、陰性參考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀釋度作為工作濃度。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）的基本原理有三條：
1. 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,，并保持其免疫學(xué)活性；
2. 抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性,；
3. 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果,。
注意事項(xiàng) :
正式實(shí)驗(yàn)時(shí),，應(yīng)分別以陽性對(duì)照和陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,，待測樣品應(yīng)做一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。有時(shí)本底較高,，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清,，兔血清,、BSA或OVA等封閉。
