Transwell細(xì)胞遷移實驗技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

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簡介：世界*品牌Transwell細(xì)胞遷移實驗技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
Transwell細(xì)胞遷移實驗技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實驗,。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>實驗介紹
細(xì)胞遷移與侵襲實驗將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔,，將研究的細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性,，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞,，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng),、細(xì)胞趨化,、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究,。
實驗步驟：
1材料準(zhǔn)備：
可拍照顯微鏡,，Transwell小室，孔徑8μm,，沒包被膠的(Coster和Corning公司的也較常用),，Transwell遷移實驗的細(xì)胞培養(yǎng)板24孔板。細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購買的Transwell小室相配套,，BD公司的Matrigel,，無血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培養(yǎng)基,，DMEM*培養(yǎng)基,，1640*培養(yǎng)基（也可加到20%血清），無菌PBS,，棉簽,，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇,，結(jié)晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS結(jié)晶紫）
2步驟和流程
2.1基質(zhì)膠鋪板：
用BD公司的Matrigel 1：8（根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生mmp的量來決定）稀釋,，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠,。使用前進(jìn)行基底膜水化,。
2.2制備細(xì)胞懸液
①制備細(xì)胞懸液前可先讓細(xì)胞撤血清饑餓12－24h,，進(jìn)一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的,。
②消化細(xì)胞,，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，（用PBS洗1－2遍）,，用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸,。調(diào)整細(xì)胞密度至5×105/ml。
2.3接種細(xì)胞
①取細(xì)胞懸液100μl加入Transwell小室,。
②24孔板下室一般加入600μl含20%PBS的培養(yǎng)基,，特別注意的是，下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生,，一旦產(chǎn)生氣泡,，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心,，一旦出現(xiàn)氣泡,，要將小室提起，去除氣泡,，再將小室放進(jìn)培養(yǎng)板。
③培養(yǎng)細(xì)胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定）,。24h較常見,，時間點(diǎn)的選擇除了要考慮到細(xì)胞細(xì)胞侵襲力外，處理因素對細(xì)胞數(shù)目的影響也不可忽視,。
2.4結(jié)果統(tǒng)計
直接計數(shù)法,，“貼壁"細(xì)胞計數(shù)，這里所謂的“貼壁"是指細(xì)胞穿過膜后,，可以附著在膜的下室側(cè)而不會掉到下室里面去,，通過給細(xì)胞染色，可在鏡下計數(shù)細(xì)胞,。
取出Transwell小室,，棄去孔中培養(yǎng)液，用無鈣的PBS洗2遍,，甲醇固定30分鐘,，將小室適當(dāng)風(fēng)干。
0.1%結(jié)晶紫染色20 min,，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞,，用PBS洗3遍。
400倍顯微鏡下隨即五個視野觀察細(xì)胞,，記數(shù),。
實驗周期：
1個月

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