Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

時(shí)間：2015/5/15閱讀：812

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簡(jiǎn)介：世界*品牌Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn),。另一方面,，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
1材料準(zhǔn)備：
可拍照顯微鏡,，Transwell小室，孔徑8μm,，沒(méi)包被膠的(Coster和Corning公司的也較常用),，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板24孔板。細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購(gòu)買(mǎi)的Transwell小室相配套,，BD公司的Matrigel,，無(wú)血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培養(yǎng)基,，DMEM*培養(yǎng)基,，1640*培養(yǎng)基（也可加到20%血清），無(wú)菌PBS,，棉簽,，胰酶（0.25?TA胰酶），4%多聚甲醛固定液或者甲醇,，結(jié)晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS結(jié)晶紫）
2步驟和流程
2.1基質(zhì)膠鋪板：
用BD公司的Matrigel 1：8（根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生mmp的量來(lái)決定）稀釋,，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠,。使用前進(jìn)行基底膜水化,。
2.2制備細(xì)胞懸液
①制備細(xì)胞懸液前可先讓細(xì)胞撤血清饑餓12－24h，進(jìn)一步去除血清的影響,。但這一步并不是必須的。
②消化細(xì)胞,，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液,，（用PBS洗1－2遍）,，用含BSA的無(wú)血清（或者1?S）培養(yǎng)基重懸。調(diào)整細(xì)胞密度至5×105/ml,。
2.3接種細(xì)胞
①取細(xì)胞懸液100μl加入Transwell小室,。
② 24孔板下室一般加入600μl含20?S的培養(yǎng)基，特別注意的是,，下層培養(yǎng)液和小室間常會(huì)有氣泡產(chǎn)生,，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了,，在種板的時(shí)候要特別留心,，一旦出現(xiàn)氣泡，要將小室提起,，去除氣泡,，再將小室放進(jìn)培養(yǎng)板。
③培養(yǎng)細(xì)胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定）,。24h較常見(jiàn),，時(shí)間點(diǎn)的選擇除了要考慮到細(xì)胞細(xì)胞侵襲力外，處理因素對(duì)細(xì)胞數(shù)目的影響也不可忽視,。
2.4結(jié)果統(tǒng)計(jì)
直接計(jì)數(shù)法,，“貼壁"細(xì)胞計(jì)數(shù)，這里所謂的“貼壁"是指細(xì)胞穿過(guò)膜后,，可以附著在膜的下室側(cè)而不會(huì)掉到下室里面去,，通過(guò)給細(xì)胞染色，可在鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞,。
取出Transwell小室,，棄去孔中培養(yǎng)液，用無(wú)鈣的PBS洗2遍,，甲醇固定30分鐘,，將小室適當(dāng)風(fēng)干。
0.1%結(jié)晶紫染色20 min,，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞,，用PBS洗3遍。
400倍顯微鏡下隨即五個(gè)視野觀察細(xì)胞,，記數(shù),。

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