Transwell實驗技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務

時間：2015/5/15閱讀：552

關(guān)鍵詞:Transwell實驗技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務
簡介：世界*品牌Transwell實驗技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務原裝，質(zhì)量保證,*。
Transwell實驗技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗,。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>檢測穿過的細胞數(shù)有兩種方法：
1 ) 直接計數(shù)法
“貼壁"細胞計數(shù):
“貼壁"是指細胞穿過膜后,，可以附著在膜的下室側(cè)而不會掉到下室里面去。通過給細胞染色,，可在鏡下計數(shù)細胞
A. 用棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細胞
B. 染色：常用的0.1%結(jié)晶紫染色,。
優(yōu)點：(1) 不需固定細胞，直接染色即可,。
(2) 配制簡單方便,。
(3) 可以用33%醋酸脫色，測量洗脫液OD570值,，間接反映細胞數(shù)
注意,，染色前要將膜風干，否則可能會染不上,。
C. 細胞計數(shù)：
(1) 顯微鏡進行觀察和拍照
(2) 取3-5個視野計數(shù)細胞個數(shù)
2) 間接計數(shù)法
用于穿過細胞過多,，而無法通過計數(shù)獲得準確的細胞數(shù)。
MTT法
A. 棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細胞
B. 24孔板中加入500μl含0.5mg/ml MTT的*培養(yǎng)基,，將小室浸沒于其中,，置于37℃2-4h后取出。
C. 24孔板中加入500μl DMSO,，將小室浸沒于其中,，振蕩結(jié)晶充分溶解。
D. 取出小室,，測所得DMSO的OD值,。
結(jié)晶紫檢測
A. 棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細胞
B. （可選）甲醛固定30分鐘，室溫
B. 24孔板中加入500μl 0.1%結(jié)晶紫溶液,，將小室浸沒于其中,，室溫放置20分鐘
C. 24孔板中加入500μl 33%醋酸，將小室浸沒于其中,，脫色,。
D. 取出小室，測量洗脫液OD570值,。
優(yōu)點：染色和脫色的過程并不影響膜上細胞,，在脫色后還可重新染色。
一,、腫瘤細胞侵襲實驗（transwell）
原理：
模仿體內(nèi)細胞外基質(zhì),，細胞只有分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）,，降解基質(zhì)膠才可進入下室。
步驟
1. Transwell小室準備
1）無基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 包被基底膜：
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀釋,，無血清培養(yǎng)基作為稀釋液
B. 取適量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),，4℃操作。
C. 37℃培養(yǎng)箱中,，孵育4-5h（>5h）,；出現(xiàn)“白色層"時，說明已經(jīng)變?yōu)楣虘B(tài),。
2）有基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 小室放入培養(yǎng)板中,，上室加入300μl預溫的無血清培養(yǎng)基
B. 室溫下靜置15－30min，使基質(zhì)膠再水化
C. 再吸去剩余培養(yǎng)液,。
2．細胞懸液準備
1）消化,、收集細胞；
2）PBS洗1－2次
3）用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸（細胞密度約在1－10×105/ml）,。
3. 細胞接種
1）取適量細胞懸液加入Transwell小室（按transwell說明）,。24孔板小室一般200μl。
2）24孔板下室一般加入500μl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基,。注意避免氣泡產(chǎn)生（下層培養(yǎng)液和小室間）
3）培養(yǎng)細胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細胞侵襲能力而定）,。
4. 結(jié)果統(tǒng)計

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