人輪狀病毒IgG（RV-IgG）Elisa試劑盒
人輪狀病毒IgG（RV-IgG）Elisa試劑盒使用說明書
人輪狀病毒IgG（RV-IgG）Elisa試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：48T
藥物通用名：人輪狀病毒IgG（RV-IgG）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：本試劑盒定性測定人血液,、或其它相關(guān)組織中輪狀病毒IgG（RV-IgG）,。
實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中人輪狀病毒IgG（RV-IgG）。用純化的輪狀病毒IgG（RV-IgG）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中輪狀病毒IgG（RV-IgG）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的輪狀病毒IgG（RV-IgG）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中人輪狀病毒IgG（RV-IgG）的存在與否,。
組成：
1 20 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑3ml×1/瓶8 陽性對照0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×4 條9 陰性對照0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液3ml×1 瓶12 密封袋1 個
標(biāo)本要求：
1．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。如不能及時檢測，可將標(biāo)本在-20℃保存一個月,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測
3．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟：
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml 后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgG（RV-IgG）陽性
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgG（RV-IgG）陰性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
5．底物請避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M 的硫酸,，使用時必須注意安全。
8．試劑盒保存：2-8℃,。
9．有效期：6個月
