人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）ELISA試劑盒說明書
人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）ELISA試劑盒只能用于科學(xué)研究,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
檢測原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，計算樣品濃度,。
樣品收集、處理及保存方法:
1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2.血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3.細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5.保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品:
1.37℃恒溫箱
2.酶標儀（450nm）
3.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
操作注意事項:
1.試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。
3.濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，zui終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
4.嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻,。
人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）ELISA試劑盒組成:
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、5、10,、20,、40、80 pg/mL
試劑的準備:20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1:20 稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法
1.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5次,。
2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。
操作步驟:
1.從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B 各50μL，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD值,。
結(jié)果判斷:繪制標準曲線：在Excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標,，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能:
1.準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,，大于等于0.9900,。
2.靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。
3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4.重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。
5.貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
6.有效期：6個月
