人弓形蟲（Tox）Elisa試劑盒說明書
人弓形蟲（Tox）Elisa試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍:96T
使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中弓形蟲（Tox）表達(dá),。
實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人弓形蟲（Tox）表達(dá)。用純化的人弓形蟲（Tox）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中弓形蟲（Tox）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的弓形蟲（Tox）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人弓形蟲（Tox）的存在與否,。
人弓形蟲（Tox）Elisa試劑盒組成:
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求:
1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟:
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔,、陽性對(duì)照2 孔,、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰,、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
計(jì)算和結(jié)果判定：
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為弓形蟲（Tox）陽性
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為弓形蟲（Tox）陰性,。
注意事項(xiàng):
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
4.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存,。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測(cè)時(shí)，參考波長為630nm
7.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存：2-8℃,。
2.有效期：6個(gè)月
