人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）ELISA試劑盒說明書
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）ELISA試劑盒僅供研究使用
檢測范圍：0.533 mIU/ml-40 mIU/ml
zui低檢測限：0.03 mIU/ml
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定人血清,，血漿及其它相關(guān)生物液體中NAG含量,。
說明:
1.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象,，不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
實驗原理:采用競爭酶聯(lián)免疫法法檢測NAG含量,。首先用一株單抗體包被微孔板，制備成固相抗體,，然后加入待測標本或標準品,，以及辣根過氧化物酶標記的NAG，使之形成包被抗體- -NAG（HRP）復(fù)合物,。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值（OD值）,，通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線，反算出待測標本中NAG含量,。
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）ELISA試劑盒組成及試劑配制:
1.酶聯(lián)板（Assay plate ）:一塊（96孔）,。
2.標準品（Standard）:5×0.5 ml/瓶。
Standard S1 S2 S3 S 4 S 5
Concentration （mIU/ml） 0.533 1.067 2.67 10.67 40
3.酶結(jié)合物（HRP-conjugate）:1×6ml/瓶,。
4.顯色劑A（Substrate A）:1×7ml/瓶,。
5.顯色劑B（Substrate B）:1×7ml/瓶。
6.濃洗滌液（Wash Buffer）:1×15ml/瓶,，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍,。
7.終止液（Stop Solution）:1×7ml/瓶
需要而未提供的試劑和器材:
1.標準規(guī)格酶標儀
2.高速離心機
3.電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.干凈的試管和Eppendof管
5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時,，用多通道移液器
6 蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存:
1.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：以上標本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,，-20℃不應(yīng)超過1個月,，-80℃不應(yīng)超過2個月,；標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
操作步驟：
1.將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時,，取濃縮洗滌液，根據(jù)當批檢測數(shù)量,，用蒸餾水1：20稀釋,，混勻后備用。
2.將酶標板取出,，設(shè)一個空白對照孔,、不加任何液體；每個標準點依次各設(shè)兩孔,，每孔加入相應(yīng)標準品50ul,；其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。
3.每孔加入酶結(jié)合物50ul（空白對照孔除外）,，充分混勻,，貼上不干膠封片，置37℃溫育1小時,。
4.手工洗板,，棄去孔內(nèi)液體。洗滌液注滿各孔,，靜置10秒甩干,，重復(fù)三次后拍干；洗板機洗板,，選擇洗滌三次程序,，洗板后拍干。
5.每孔加顯色劑A液50μl,，顯色劑B液50μl,，振蕩混勻后，37℃避光顯色15分鐘,，每孔加終止液50μl,。
6.用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm,，先用空白孔調(diào)零點,，然后測定各孔OD值。
數(shù)據(jù)處理:
1.計算機:使用線性擬合功能,應(yīng)將標準品S1-S5的濃度取對數(shù)（Log（濃度））作為X,將對應(yīng)的OD值減去空白對照孔OD值后取對數(shù)（Log（OD值-NSB））作為Y,進行線性擬合,。再從擬合線上計算出待測血清濃度。
2.手工作圖：用雙對數(shù)坐標紙，以標準品濃度為橫軸,，以對應(yīng)的0D值為縱軸,，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清OD值找到對應(yīng)的濃度值,。
注意事項:
1.從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預(yù)包被板條應(yīng)置室溫（18-25℃）平衡30分鐘后方可使用,，余者應(yīng)及時封好口，放回2-8℃中避光保存,，以備后用,。
2.使用前試劑應(yīng)搖勻。
3.結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成,。
4.不同批號的試劑不可混用,。
5.加樣時應(yīng)注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
6.操作時,，試劑盒內(nèi)每種試劑各使用一個吸頭,，每一種標準品使用一個吸頭，每一個樣品各使用一個吸頭,，吸頭一次性使用,。
特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的NAG，且與其他相關(guān)蛋白基本無交叉反應(yīng),。
有效期：6個月（2-8℃避光保存）
