人S-100ELISA試劑盒使用說明書
人S-100ELISA試劑盒僅供研究使用
檢測范圍:78 pg/mL -5000 pg/mL;
實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中S-100水平,。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入S-100抗原,、生物素化的抗人S-100抗體、HRP標記的親和素,，經過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的S-100呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度,。
預期應用:ELISA法定量測定人血清,、血漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關液體中S-100含量,。
人S-100ELISA試劑盒組成及試劑配制:
1.酶聯板:一塊（96孔）
2.標準品（凍干品）：2瓶,，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上,，然后反復顛倒/搓動以助溶解,，其濃度為5000 pg/mL，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋成5000 pg/mL,，2500 pg/mL，1250 pg/mL,，625 pg/mL,，312.5 pg/mL，156 pg/mL,，78 pg/mL其原液直接作為zui高標準濃度,，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/mL，臨用前15分鐘內配制,。如配制2500 pg/mL標準品：取0.5ml 5000 pg/mL的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,，混勻即可，其余濃度以此類推,。
3.樣品稀釋液:1×20ml/瓶,。
4.檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5.檢測稀釋液B:1×10ml/瓶,。
6.檢測溶液A:1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml,。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時內配制。
7.檢測溶液B:1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋,。稀釋方法同檢測溶液A,。
8.底物溶液:1×10ml/瓶。
9.濃洗滌液:1×30ml/瓶,，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
10.終止液:1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
標本的采集及保存:
1.細胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清,，并將標本保存于-20℃,，且應避免反復凍融。
2.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融,。
注:標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
操作步驟:
各試劑在使用前平衡至室溫,。
1.加樣:分別設空白孔、標準孔,、待測樣品孔。除空白孔外,，余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,，注意不要有氣泡，輕輕混勻,，酶標板加上蓋,，37℃反應120分鐘。
2.棄去液體,，甩干,，不用洗滌。
3.每孔加檢測溶液A工作液 100ul,，37℃,60分鐘,洗板3次,，350ul/每孔，甩干,。
4.每孔加檢測溶液B工作液 100ul,，37℃,60分鐘,洗板5次,，甩干。
5.依序每孔加底物溶液90ul,，37℃避光顯色30分鐘（此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯）。
6.依序每孔加終止溶液50ul,，終止反應（此時蘭色立轉黃色）,。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。
注：
1.每次實驗留一孔作為空白調零孔,，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零,。
2.為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內。
洗板方法:
1.手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘,，根據需要，重復此過程數次,。
2.自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算:以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標）,，OD值為縱坐標（普通坐標）,，在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數,；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度,。
特異性:本試劑盒可同時檢測重組或天然的人S-100,，且與其它相關蛋白無交叉反應。
注意事項:
1.洗滌過程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽性,。
2.一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣,。
3.請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。
4.如標本中待測物質含量過高,，請先稀釋后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數。
5.在配制標準品,、檢測溶液工作液時,，請以相應的稀釋液配制，不能混淆,。
6.底物請避光保存,。
說明:
1.剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F象,，不會對實驗結果造成任何影響。
2.濃洗滌液會有鹽析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
3.中、英文說明書可能會有不一致之處,，請以英文說明書為準,。
4.試劑盒保存:-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）,。
5.有效期:6個月,。
