L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎?L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的,。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有zui終定論,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。哪種培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,？酚紅在培養(yǎng)基中用作PH值的指示劑：中性時為紅色,，酸性時為黃色，堿性時為紫色,。研究表明,，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）,。為避免固醇類反應(yīng),，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時,，用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測,，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎,？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？二價離子的確抑制胰蛋白酶活性,。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前,，用EDTA清洗細(xì)胞,，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,？ 丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是,，如果沒有葡萄糖的話,，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。室溫下配制的Tris-HCl溶液,，在37℃使用時PH值是多少,？ 緩沖液PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,，25℃,，37℃時，不同PH值,。50mM Tris-HC 溶液在4℃,，25℃，37℃時,，不同PH值 4°C 25°C 37°C 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 9.3 9.4 8.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 ,。在Sf9, Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時，肝素的使用量是多少,？為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成,，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液。在重新凍存sf9細(xì)胞前,，它可以傳多少代,？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會降低嗎,？ 通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后,，應(yīng)該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時,，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力,。如果超過95％的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,，細(xì)胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,，它們的感染力將不在是有效的,。貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，在放置幾天后顏色變紫? 這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升,。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘,，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）為什么要在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液? 胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定,。保存血清的方法? 我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃,。若存放于4℃時，請勿超過一個月,。若一次無法用完一瓶,，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理? 血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會存在于血清中,，亦是造成沉淀物的原因之一,。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量,。若欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因為它可能會阻塞過濾膜。為什么要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞,、平滑肌細(xì)胞時,，推薦使用熱滅活血清,。為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?有些胎牛血清產(chǎn)品沒有預(yù)老化，儲存在2－8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素,、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量,。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復(fù)凍融,。怎樣避免沉淀物的產(chǎn)生?我們建議您在使用血清的時候,，注意下列的操作:（1）解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫）,，若血清解凍時改變的溫度太大（如-20℃至37℃）,，非常容易產(chǎn)生沉淀物。（2）解凍血清時,，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。（3）請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久，血清會變得混濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量。（4）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。（5）若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多