乾思 生物編輯整理：
血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題,，價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長(zhǎng)因子,，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì),，而將它們置于50℃以上的溫度長(zhǎng)達(dá)30分鐘是*沒有必要的,。盡管如此，在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,，多數(shù)實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對(duì)血清中的生長(zhǎng)因子,，氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響,，在我們的技術(shù)中zui常被提到的就是否該對(duì)血清進(jìn)行熱滅活，下面我們就對(duì)胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋,。
根據(jù)調(diào)查,，至少70％的研究者對(duì)血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘Ｒ?guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的,。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等.其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘,。隨著血清采集、處理,、加工工藝的提高,，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性,。
熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),，但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott［1］曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定,，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,，C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50％,，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出,。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果,。即使是在未稀釋的血清中,，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外,，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,，也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。
在對(duì)補(bǔ)體滅活以外,，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作用,。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時(shí),，血清中支原體的污染時(shí)有發(fā)生,。針對(duì)這個(gè)問題，HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù),，自從采用這項(xiàng)技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后,，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個(gè)原因,。
Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化［2］,；有研究結(jié)果［3］證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用，在用SV-BHK,、BALB-3T3,、CV－1,、FS-4細(xì)胞對(duì)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中，熱滅活對(duì)胎牛血清的影響小于對(duì)小牛血清的影響,。
我們調(diào)查了熱滅活對(duì)胎牛血清以及對(duì)其中不同細(xì)胞株生長(zhǎng)能力的影響,。通過比較11個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株（HBAE,，MDBK,，Vero，成纖維細(xì)胞,，MRC-5）的生長(zhǎng)帶來負(fù)面影響,，三個(gè)細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響,，而只有兩個(gè)細(xì)胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid）,，在熱滅活之后,，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善。所以,，在正常的操作下,，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的促進(jìn)作用。
在正常操作下,，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面的影響,，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,。注意到這個(gè)現(xiàn)象之后,，為了驗(yàn)證污染的存在，或者促進(jìn)沉淀的溶解,，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育,。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出,，為了確信血清未被污染,，進(jìn)行的鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗(yàn),，和革蘭氏染色試驗(yàn)更是浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)者大量的時(shí)間和精力,。
總之，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的,。很多場(chǎng)合下,，熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng)，卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力,。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,，其促進(jìn)的比率也是微不足道的,。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩,。我們建議，對(duì)于那些對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶,，需要通過試驗(yàn)來證實(shí)其必要性,，確定滅活的適當(dāng)條件；在滅活過程中,，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測(cè),，并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。
參考文獻(xiàn)：
1,、Triglia, R.P., Linscott, W.D. 1980. Titers of nine complement components, conglutinin and C3binactivator in adult and fetal bovine sera. Mol. Immunol. 17:741-748.
2,、Pinyopummintr, T., and Bavister, B.D. 1994.Development of bovine Embryos in a Cell-Free Medium - Effects of Type of Serum, Timing of its Quidellusion and Heat Inactivation. Theriogenology. 41:1241-1249.
3、Giard, D.J. 1987. Routine Heat Inactivation of Serum Reduces its Capacity to Promote Cell Attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology. 23:691-697.
