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SLS技術(shù)在胞外多糖(EPS)結(jié)構(gòu)表征方面的應(yīng)用
閱讀:58 發(fā)布時(shí)間:2025-5-19“癌癥"!這個(gè)詞似乎在日常生活中離我們非常遙遠(yuǎn),,但我們又總能聽(tīng)到身邊有人罹患癌癥的沉痛消息,。據(jù)統(tǒng)計(jì),2020年全球有近1000萬(wàn)例(或近六分之一)的死亡由癌癥導(dǎo)致?,F(xiàn)代人們?cè)S多不良的生活習(xí)慣(如:抽煙,、飲酒)、果蔬攝入量低,、過(guò)度肥胖等均是引發(fā)癌癥的關(guān)鍵因素,。
作為癌癥亞型,惡性腫瘤同樣具有高致死率特征?,F(xiàn)階段常規(guī)癌癥治療手段主要包括手術(shù)切除,、化學(xué)療法與放射療法。然而,,這些療法存在顯著毒副作用,,包括腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性、正常細(xì)胞毒性及免疫損傷等,。因此,,開(kāi)發(fā)低毒副作用的新型抗癌藥物已成為當(dāng)務(wù)之急。
近年來(lái),,天然產(chǎn)物因其相較于合成分子具有低毒副作用的潛在生物活性而備受關(guān)注,。部分乳酸菌菌株所產(chǎn)胞外多糖(EPS)的抗腫瘤活性已獲研究證實(shí)。而多糖的抗腫瘤活性受其單糖組成,、蛋白含量,、分子量、糖苷鍵位置及取代基團(tuán)等多重結(jié)構(gòu)因素影響,。
南昌大學(xué)陶雪瑩研究團(tuán)隊(duì)2020年在《International Journal of Biological Macromolecules》發(fā)表了一篇題為“Characterization and antitumor activity of novel exopolysaccharide APSof Lactobacillus plantarum WLPL09 from human breast milk"的文章,,文章報(bào)道了他們通過(guò)離子交換層析法從母乳源植物乳桿菌WLPL09中分離純化獲得兩種胞外多糖NPS與APS,,然后對(duì)其進(jìn)行了初步結(jié)構(gòu)表征,并采用人肝癌HepG2細(xì)胞系,、人結(jié)腸腺癌HCT-8細(xì)胞系及人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系評(píng)估其體外抗腫瘤活性,。
其中,研究團(tuán)隊(duì)使用布魯克海文公司的BI-MwA,、BI-RIVS和BI-DNDC對(duì)兩種多糖(APS和NPS)的均一性和重均分子量進(jìn)行了分析測(cè)定,。
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EPS的提取與純化:
1.1 菌株培養(yǎng):植物乳桿菌WLP109在MRS培養(yǎng)基中37℃厭氧培養(yǎng)24 h。
1.2 EPS粗提:離心(9000×g,,5 min)去除菌體,上清液用2倍體積冷乙醇沉淀48 h,,再經(jīng)Sevag法去除蛋白質(zhì),,透析后凍干得粗EPS。
1.3 離子交換色譜純化:采用?KTA Prime Plus系統(tǒng),,HiTrap Q HP柱,,依次用純水、0.9 M,、1.1 M,、1.5 M NaCl洗脫,收集APS(0.9 M NaCl洗脫組分)和NPS(水洗脫組分),。
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多糖均一性和分子量測(cè)定
研究團(tuán)隊(duì)將多角度靜態(tài)光散射檢測(cè)器 (BI-MwA,,美國(guó)布魯克海文儀器公司)與尺寸排阻色譜(SEC,美國(guó)安捷倫科技公司),、示差折光檢測(cè)器(DRI,,美國(guó)布魯克海文儀器公司)聯(lián)用,構(gòu)建了SEC-MALLS-RI系統(tǒng)用于多糖均一性和分子量的測(cè)定,。流動(dòng)相使用含0.02 g/L NaN3的0.1 M NaNO3溶液,,折光指數(shù)增量(dn/dc)使用BI-DNDC(美國(guó)布魯克海文儀器公司)測(cè)量得到,dn/dc值為0.141 mL/g,。EPS樣品(5.0 mg/mL)經(jīng)0.22 μm濾膜(Millex HA)過(guò)濾,。
BI-MwA檢測(cè)器可以與任何品牌的液相連用,同時(shí)也支持單機(jī)使用,,可得到絕對(duì)重均分子量Mw,、第二維里系數(shù)A2、Rg等重要參數(shù),。
多糖均一性和重均分子量測(cè)定:
如圖A,、B所示,NPS和APS均呈現(xiàn)單一對(duì)稱(chēng)峰,,表明其為均一性多糖,。經(jīng)計(jì)算,,NPS和APS的重均分子量(Mw)分別為72.60 kDa與33.22 kDa。
這項(xiàng)研究展示了SLS技術(shù)在天然活性物質(zhì)研究中的強(qiáng)大能力,。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展,,SLS必將在更多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用,助力科學(xué)家揭開(kāi)更多天然產(chǎn)物的活性?shī)W秘,。