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目的：為檢測(cè)和定量人血漿中目標(biāo)制劑混合物開(kāi)發(fā)一種靈敏,、耐用和可重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析 方法,。

前言：在大多數(shù)制藥企業(yè)中，小分子候選藥物作為新化學(xué)實(shí)體或仿制藥,，占據(jù)了藥物發(fā)現(xiàn)管道 的大部分比例,。目標(biāo)定量分析是工作流程的一個(gè)關(guān)鍵組成部分，其要求成功開(kāi)發(fā)出 小分子藥物,。而這些目標(biāo)定量分析必須在生物基質(zhì)中完成,，因此，常常帶來(lái)分析挑戰(zhàn),。 在本項(xiàng)研究中,，我們報(bào)道了為大鼠血漿中多個(gè)藥物標(biāo)準(zhǔn)品開(kāi)發(fā)的靈敏、耐用,、可靠和可 重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析方法,。

實(shí)驗(yàn)：樣品制備 采用乙腈（ACN): 血漿 =3:1 破壞血漿，從而制備已破壞的血漿 儲(chǔ)備液,。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘,。去除上 清液，并加入等體積的水,，終得到已破壞血漿的儲(chǔ)備原液,。 將已破壞血漿儲(chǔ)備混合液中每種標(biāo)準(zhǔn)化合物濃度為 1 mg/mL 的 儲(chǔ)備液稀釋至 1 pg/mL–25,000 pg/mL 和 10 pg/mL-100,000 pg/mL。將同位 素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)化合物加入到每個(gè)校正水平上,，從而得到終濃 度為 0.5ng/mL 的內(nèi)標(biāo)溶液,。所有試劑均購(gòu)自 Cerilliant 公司（朗 德羅克,，得克薩斯州），濃度為 1 mg/mL 的甲醇溶液,。

液相色譜法：采用 賽默飛 VanquishTM Horizon HPLC 系統(tǒng) 進(jìn)行色譜分離,。所使用的色譜柱為 Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ C18 極性封端 LC 色譜柱（100 × 2.1 mm，1.9 µm 粒徑）,。流動(dòng)相 A 和 B 分別為 10 mM 甲 酸銨水溶液（采用 Fisher ChemicalTM OptimaTM 級(jí)純水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液,。柱溫為 50 ℃?？傔\(yùn)行時(shí)間為 3.5 分鐘（表 1）,。

質(zhì)譜分析法 采用賽默飛 TSQ AltisTM三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜分析，配置 Thermo ScientificTM OptaMaxTM NG 離子源室,。 表 2 和表 3 顯示了實(shí)驗(yàn)設(shè)置中使用的質(zhì)譜儀離子源和 SRM 參 數(shù),。

數(shù)據(jù)分析：采用 Thermo ScientificTM TraceFinderTM 軟件采集并處理數(shù)據(jù)。

結(jié)果與討論：研究發(fā)現(xiàn),，采用 TSQ Altis MS 測(cè)得的每個(gè)候選藥物的定量下限 （LLOQ）明顯低于采用以前幾代 MS 系統(tǒng)的測(cè)量值（表 4）,。 此外，內(nèi)標(biāo)化合物的 %CV 值顯著降低也意味著 TSQ Altis 質(zhì)譜 的耐用性和重現(xiàn)性更優(yōu),。300 pg/mL QC 2 的典型色譜圖見(jiàn)圖 1。 QC 線性和重現(xiàn)性的更多詳細(xì)信息見(jiàn)表 5,。

結(jié)論：本應(yīng)用文檔中涉及的分析方法在整個(gè)分析的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)呈現(xiàn)出 優(yōu)異的線性和重現(xiàn)性,。該方法表明，TSQ Altis 質(zhì)譜提供了藥物 化合物分析中所需的靈敏度和重現(xiàn)性,。

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