目的:為檢測和定量人血漿中目標制劑混合物開發(fā)一種靈敏、耐用和可重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析 方法,。
前言:在大多數(shù)制藥企業(yè)中,,小分子候選藥物作為新化學實體或仿制藥,占據(jù)了藥物發(fā)現(xiàn)管道 的大部分比例,。目標定量分析是工作流程的一個關鍵組成部分,,其要求成功開發(fā)出 小分子藥物。而這些目標定量分析必須在生物基質中完成,,因此,,常常帶來分析挑戰(zhàn)。 在本項研究中,,我們報道了為大鼠血漿中多個藥物標準品開發(fā)的靈敏,、耐用、可靠和可 重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析方法,。
實驗:樣品制備 采用乙腈(ACN): 血漿 =3:1 破壞血漿,,從而制備已破壞的血漿 儲備液。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘,。去除上 清液,,并加入等體積的水,終得到已破壞血漿的儲備原液,。 將已破壞血漿儲備混合液中每種標準化合物濃度為 1 mg/mL 的 儲備液稀釋至 1 pg/mL–25,000 pg/mL 和 10 pg/mL-100,000 pg/mL,。將同位 素標記的內標化合物加入到每個校正水平上,從而得到終濃 度為 0.5ng/mL 的內標溶液,。所有試劑均購自 Cerilliant 公司(朗 德羅克,,得克薩斯州),,濃度為 1 mg/mL 的甲醇溶液。
液相色譜法:采用 賽默飛 VanquishTM Horizon HPLC 系統(tǒng) 進行色譜分離,。所使用的色譜柱為 Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ C18 極性封端 LC 色譜柱(100 × 2.1 mm,,1.9 µm 粒徑)。流動相 A 和 B 分別為 10 mM 甲 酸銨水溶液(采用 Fisher ChemicalTM OptimaTM 級純水) 和 0.1% 甲酸乙腈溶液,。柱溫為 50 ℃,。總運行時間為 3.5 分鐘(表 1),。
質譜分析法 采用賽默飛 TSQ AltisTM三重四極桿質譜儀進行質譜分析,,配置 Thermo ScientificTM OptaMaxTM NG 離子源室。 表 2 和表 3 顯示了實驗設置中使用的質譜儀離子源和 SRM 參 數(shù),。
數(shù)據(jù)分析:采用 Thermo ScientificTM TraceFinderTM 軟件采集并處理數(shù)據(jù),。
結果與討論:研究發(fā)現(xiàn),采用 TSQ Altis MS 測得的每個候選藥物的定量下限 (LLOQ)明顯低于采用以前幾代 MS 系統(tǒng)的測量值(表 4),。 此外,,內標化合物的 %CV 值顯著降低也意味著 TSQ Altis 質譜 的耐用性和重現(xiàn)性更優(yōu)。300 pg/mL QC 2 的典型色譜圖見圖 1,。 QC 線性和重現(xiàn)性的更多詳細信息見表 5,。
結論:本應用文檔中涉及的分析方法在整個分析的動態(tài)范圍內呈現(xiàn)出 優(yōu)異的線性和重現(xiàn)性。該方法表明,,TSQ Altis 質譜提供了藥物 化合物分析中所需的靈敏度和重現(xiàn)性,。
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