基線噪音是做液相的同學(xué)經(jīng)常感到頭疼的問題,尤其是在做痕量分析的時候。今天,，我們來分析下噪音的來源,，以及如何減小和消除噪音。

一,、 多種流動相的在線混合
流動相在線混合是為了簡化實驗步驟,，流動相混合的不充分是基線噪音的一個重要來源。
流動相混合方式主要兩種：
1.低壓混合：采取時間脈沖的方式,，利用比例閥,，將不同流動相按一定比例混合。
2.高壓混合：利用多個泵頭,，控制每個泵的流量,，來將流動相按一定比例混合。
    從流動相開始混合在一起,，到流動相到達(dá)色譜柱頭,，這一段體積叫做延遲體積(Delay Volume)?；旌掀黧w積越大,，混合越好，但是相應(yīng)延遲體積就越大，會造成梯度的延遲,。換句話說,，就是流動相的變化，需要一定時間后,，才能真正到達(dá)色譜柱,，對分離產(chǎn)生影響。這個現(xiàn)象在使用UPLC或者UHPLC的時候,，會有比較明顯的作用,。

那如何減小因為混合而造成的基線噪音呢？
1.對于等度的方法：非常簡單,，預(yù)混流動相就可以了,。
2.對于梯度的方法：部分預(yù)混流動相也會幫助更好的混合，怎么做呢,？看下面的例子,。
    方法要求乙腈/水比例從10%走到85%。那可以將流動相A配成10%的乙腈,，流動相B配成85%的乙腈,，然后A/B梯度從0%走到100%。這就是部分預(yù)混,。
3.增大混合器的體積：一般混合器的體積從幾百ul到幾ml都有,，在允許的延遲時間下，更換一個體積更大的混合器,，能夠有效提高混合的效率,。

二、液相硬件問題造成的基線噪音
如果液相系統(tǒng)某些地方的工作不正常,，也可能造成基線的噪音,。
1.系統(tǒng)有漏：特別是肉眼無法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會造成流速的變化和混合比例的變化,，從而導(dǎo)致基線噪音,。
    檢查的方法就是對系統(tǒng)進(jìn)行壓力測試：將系統(tǒng)從某個地方用死堵堵上，如泵出口,，或者自動進(jìn)樣器出口,，將壓力升高到350bar后停泵，監(jiān)測壓力下降的情況,。一般的標(biāo)準(zhǔn)是2-3bar/min的下降是正常水平,。或者15%/10min的下降,。
2.梯度比例問題：可以對系統(tǒng)進(jìn)行一個梯度測試,，來檢查梯度混合是否準(zhǔn)確和一致,。
梯度測試
a.將A配成0.1%的丙酮，B是水,。
b.在265nm的波長下，將A的比例從10%,，20%,，30%這樣一個一個的升高，每個比例走3min,。
c.可以根據(jù)計算,，看每個基線臺階上升是否準(zhǔn)確。
d.也可以從0-100%走一個連續(xù)的梯度,，看基線上升的平滑性和線性,。

三、流動相脫氣不好造成的基線噪音
    對流動相進(jìn)行脫氣,，不僅僅是為了防止系統(tǒng)里面氣泡的產(chǎn)生,。流動相脫氣越好，基線就會越好,。
    如今常用的脫氣方式是在線脫氣機(jī),，但是有的時候脫氣并不*。所以當(dāng)有基線噪音問題時,，可以考慮采取多種脫氣方式,。
 
    前面三點講的都是內(nèi)在原因造成的基線噪音或者波動。如果你前面的原因都找過了,，問題還沒有解決,，就得考慮一下是不是流動相里面有雜質(zhì)或是電路噪音，我們下一節(jié)繼續(xù)講解,。