梯度洗脫的原理

具體地講，當(dāng)樣品隨梯度起點的流動相進(jìn)入色譜柱入口時,，由于起點流動相中弱洗脫溶劑A含量較高,，強(qiáng)洗脫溶劑B含量較低，化合物C1(保留性適中)和化合物C2(保留較強(qiáng))因分配系數(shù)(k值)較高而滯留于色譜柱入口附近,，幾乎未移動,。一段時間后，B增加到一定數(shù)值,，C1的k值達(dá)到足夠小(比如小于10),，其在柱中的移動速率明顯增大，并且隨著B的增加,，其移動速率愈加快速,，直到tC1時流出色譜柱，被檢測器檢測到并被記錄成色譜峰C1，tC1雖然比等度時的保留時間長很多,，但C1的的平均k值卻很小,，因而色譜峰并未展寬，靈敏度仍處于較高水平,。B持續(xù)增加,，在隨后的某個時間點，C2的k值也降到10以下,，C2的移動速率也開始變快,，以與C1類似的方式于tC2被洗脫出色譜柱，其平均k值同樣很小,，色譜峰亦未展寬,，靈敏度處于較高水平。

流動相的梯度變化即流動相極性,、PH值等的梯度變化,，即洗脫能力成梯度變化。

洗脫要求

1.洗脫液體積應(yīng)足夠大,，一般要幾十倍于床體積,，從而使各峰*或基本分離；

2.梯度的上限（強(qiáng)洗脫溶劑的比例）要足夠高,，使緊密吸附的物質(zhì)能被洗脫下來,。

3.梯度不要上升太快，要恰好使移動的區(qū)帶在快到柱末端時達(dá)到解吸狀態(tài),。目的物的過早解吸,，會引起區(qū)帶擴(kuò)散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬,。