蘭博液相色譜在牡丹皮中丹皮酚的含量應(yīng)用

牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，味苦,、性微寒,，具有清熱涼血，活血散瘀的功能,。丹皮酚是丹皮中重要的有效成分,，具有鎮(zhèn)靜、催眠,、抗菌,、抗炎、抗氧化,、降血壓等多種功效,。目前采用液相色譜測定丹皮酚的含量是丹皮及其制劑質(zhì)量的控制指標(biāo)。本文采用天津蘭博的液相色譜系統(tǒng),，建立了檢測丹皮中丹皮酚的含量的方法,，結(jié)果顯示方法簡便，結(jié)果可靠,。

1 測試條件

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC）,，由AS1000自動進(jìn)樣器，Lablliance Series 高壓泵,、DAD檢測器和Lablliance色譜工作站組成,，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱,。

GC6500美國蘭博液相色譜儀

1.2試劑和樣品

丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）,，甲醇（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水,，其他試劑為分析純,，丹皮樣品購自當(dāng)?shù)厮幍辏瑏碓窗不浙~陵,。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品4 mg于100 mL容量瓶中,，用甲醇醇溶解并定容至刻度，搖勻備用,，配成40 ug/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,。測定前用流動相稀釋成所用濃度。

1.4供試品溶液的制備

取本品粗粉約0. 5 g,，精密稱定,，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇 25 mL,，稱定重量,，超聲提取30 min, 放冷, 加甲醇補(bǔ)足減失的重量,，搖勻，濾過,，精密吸取續(xù)濾液2 mL,，置25 mL量瓶中, 加甲醇稀釋到刻度, 搖勻。

1.5色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um),；

流動相：50%甲醇-水溶液（v/v）

柱溫：室溫,；

流速：1.0 mL/min；

檢測波長：274 nm,；

2測試結(jié)果：

2.1 色譜系統(tǒng)適應(yīng)性測試

按1.5的測試條件對丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測,，所得色譜圖如圖1 所示，以丹皮酚計(jì)算理論塔板數(shù)不小于3000,。

圖1 丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖

2.2線性關(guān)系,、方法檢出限考察

精密吸取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液2. 0、4. 0,、6. 0,、8. 0、10 mL置10 mL 量瓶中,，流動相稀釋至刻度,，各進(jìn)樣 20 uL，測定峰面積積分值,。以對照品溶液濃度(mg/L)對峰面積進(jìn)行回歸,，結(jié)果表明丹皮酚峰面積積分值與濃度C呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為： Y = 82. 64 + 41362. 8C,，R= 0. 9998,，線性范圍為 0. 36～2.2 ug。

2.3丹皮酚穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液, 于配制后的 0,、2,、4、8,、12,、20、24和 48 h測定, 結(jié)果表明在 48 h內(nèi)穩(wěn)定, 峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD )為 0.98% ,。

2.4丹皮酚精密度和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取丹皮供試品溶液10 uL重復(fù)進(jìn)樣8次,，根據(jù)所得面積值計(jì)算， RSD =0. 60%,。取丹皮藥材6份,，平行進(jìn)行提取測定，求得丹皮酚含量的 RSD 為1. 82%,。

2.5丹皮酚回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取 8份丹皮藥材樣品0. 5 g,，分別加入相當(dāng)于含丹皮酚0. 75 mg,、0. 25 mg的對照品溶液各4份，按1.4方法提取后進(jìn)樣分析,，測得丹皮酚的回收率分別為 97. 96,，98. 21,，RSD 為1. 84,、1. 56。進(jìn)行加樣法測定回收率, 平均回收率99. 21% , RSD= 1.60%,。

3結(jié)論

采用液相色譜對丹皮酚進(jìn)行測定,，結(jié)果顯示本方法方便、準(zhǔn)確,、精密度高,，重現(xiàn)性好，可以用來對于藥材適量進(jìn)行監(jiān)測,。