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RT-qPCR 在基因表達(dá)檢測(cè)及定量中使用極為廣泛,。傳統(tǒng)的 RT-qPCR 雖然有一步法，但是涉及到樣本 RNA 提取，過(guò)程繁雜,，影響因素較多，檢測(cè)通量很低,。該試劑盒是免提取一步法 RT-qPCR 檢測(cè)試劑盒,，細(xì)胞洗滌后，直接加裂解液裂解,，裂解液直接用作模版進(jìn)行 RT-qPCR 擴(kuò)增,，從細(xì)胞準(zhǔn)備到 PCR 結(jié)束可以在不到兩小時(shí)的時(shí)間內(nèi)完成，程序標(biāo)準(zhǔn)化,，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間及影響因素,，大大增加了檢測(cè)通量。

本檢測(cè)試劑盒為探針?lè)ǎ═aqMan probe）, 正式檢測(cè)前 PCR 各參數(shù)需要先進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證,，以保證檢測(cè)特異性及靈敏度,。本檢測(cè)試劑盒不包括 DNA 酶處理，因?yàn)?DNA 酶處理存在消化不完全的可能,，殘留 DNA 模板依然可能影響后期定量,，同時(shí) DNA 酶處理還存在滅活不完全的可能，殘留 DNA 酶活性可能影響后期 PCR 擴(kuò)增的 DNA 定量,。因此,，引物設(shè)計(jì)時(shí)需要以 RNA 序列為依據(jù)，擴(kuò)增產(chǎn)品需要至少覆蓋 2 個(gè)外顯子,，確保擴(kuò)增系統(tǒng)不能以 DNA 為模板進(jìn)行擴(kuò)增,，而只能以 RNA 為模板進(jìn)行擴(kuò)增,。