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產(chǎn)品簡介：

端粒是位于染色體末端的重復(fù)TTAGGG 序列和核蛋白的復(fù)合物,，在維持細胞增 殖和保持基因組完整性方面起著至關(guān)重要的作用,。由于端粒區(qū)域復(fù)制不完-全和成體細胞中端粒酶 TERT 的低活性,，增殖體細胞中的端粒長度隨著年齡的增長而逐漸縮短,。端粒長度的縮短導(dǎo)致細胞周期停滯,，細胞衰老和體細胞凋亡,。端粒長度的維持，使癌細胞逃脫端粒介導(dǎo)的細胞死亡途徑,，是與癌癥標(biāo)志相關(guān)的一個特征,。

本產(chǎn)品通過熒光定量 PCR 技術(shù)，使用 SYBR 綠色熒光染料,，作為 DNA 結(jié)合染料,，和擴增子上雙鏈 DNA 的任一小溝結(jié)合，而發(fā)出熒光信號,。根據(jù)每一循環(huán)的熒光強度來確定擴增產(chǎn)物的產(chǎn)量，并用循環(huán)閾值（threshold cycle,；Ct）表示,，由此定量測定猴端粒基因擴增產(chǎn)量（Ct）和參考基因 36B4 單拷貝基因擴增產(chǎn)量（Ct）,，與相應(yīng)的端粒長度和基因拷貝標(biāo)準(zhǔn)曲線,，進行對照測算，來確定猴基因組的端粒長度,。

產(chǎn)品特點：

1.操作簡便易行,。

2.本試劑盒足夠 20 個樣本的探針法熒光定量PCR 反應(yīng)。

3.本試劑盒運用 SYBR 綠色熒光染料作為標(biāo)記信號,。

4.產(chǎn)品即到即用,，性能穩(wěn)定，無核酶污染,，敏感高效,，定量準(zhǔn)確，重復(fù)性強,。

5.可以被用于動物細胞和組織等樣本端粒長度的定量檢測,。

6.猴端粒長度檢測試劑盒(染料法 qPCR)只能用于科研，不能用于臨床,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

猴端粒長度檢測反應(yīng)液××微升本色管

猴端粒長度檢測染色液××微升本色管

猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液××微升本色管

猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液××微升本色管

猴端粒長度檢測端粒引物液××微升本色管

猴端粒長度檢測端粒

內(nèi)參引物液××微升本色管

猴端粒長度檢測補充液××毫升本色瓶

猴端粒長度檢測封隔液××毫升本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸,，-20℃避光保存，有效期半年。

自備試劑

臺式離心機,，1.5 毫升離心管,，PCR 管，熒光定量PCR 儀 ,。

使用方法：

一,、標(biāo)準(zhǔn)端粒樣品制備

1.準(zhǔn)備好 7 個無菌的 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為T1 至 T5 號管

2.按下表分別加入××微升的猴端粒長度檢測補充液到 T2 至T5 管,。

3.移取××微升猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液到 T1 號管,。

4.小心移取××微升 T1 號管的猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液到T2 號管，混勻,。

5.小心移取××微升 T2 號管稀釋的猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液到T3 號管,，混勻。

6.小心移取××微升 T3 號管稀釋的猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液到T4 號管,，混勻,。

7.以此類推。

8.將 T1 至T5 號管放進冰槽里備用,；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

管號猴端粒長度檢測補充液猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液標(biāo)準(zhǔn)端粒長度

T1——××微升1.18 × 108Kb

T2××微升××微升 1 號管1.18 × 107 Kb

T3××微升××微升 2 號管1.18 × 106 Kb

T4××微升××微升 3 號管1.18 × 105 Kb T5××微升空白對照空白對照

二,、標(biāo)準(zhǔn)參考基因樣品制備

9.準(zhǔn)備好 7 個無菌的 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為 S1 至 S6 號管,。

10.按下表分別加入××微升的猴端粒長度檢測補充液到 S2 至 S6 管,。

11.移取××微升猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S1 號管。

12.小心移取××微升 S1 號管的猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S2 號管,，混勻,。

13.小心移取××微升 S2 號管稀釋的猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S3 號管，混勻,。

14.小心移取××微升 S3 號管稀釋的猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S4 號管,，混勻。

15.以此類推,。

16.將 S1 至 S6 號管放進冰槽里備用,；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

管號猴端粒長度檢測

補充液猴端粒長度檢測

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液標(biāo)準(zhǔn)參考基因拷貝數(shù)

S1——××微升2.63 ×109 拷貝數(shù)/基因組

S2××微升××微升 1 號管2.63 ×108 拷貝數(shù)/基因組

S3××微升××微升 2 號管2.63 ×107 拷貝數(shù)/基因組

S 4××微升××微升 3 號管2.63 ×106 拷貝數(shù)/基因組

S5××微升××微升 4 號管2.63 ×105 拷貝數(shù)/基因組

S6××微升空白對照空白對照

三、 定量檢測

17.準(zhǔn)備好純化的待測 DNA 樣品,。

18.進行 DNA 定量測定,。

19.準(zhǔn)備好 PCR 管，并標(biāo)記為標(biāo)準(zhǔn)端粒管,、標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參管,、待測樣品端粒管、待測樣品內(nèi)參管,、端粒陰性對照管和內(nèi)參陰性對照管,。

20.每管PCR 反應(yīng)總量為 20 微升,。

21.分別移取×微升猴端粒長度檢測反應(yīng)液到所有管里。

22.分別加入××微升待測 DNA 模板（總 20 納克）到待測樣品端粒管和待測樣品內(nèi)參管里,。

23.分別加入××微升猴端粒長度檢測補充液到端粒陰性對照管和內(nèi)參陰性對照管里,。

24.分別加入4××升上述配制的系列猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)端粒液和猴端粒長度檢測標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)端粒管和標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參管里。（注意：各選取 4 個點（105 至 108）即可）

25.分別加入××微升猴端粒長度檢測端粒引物液到標(biāo)準(zhǔn)端粒管,、待測樣品端粒管和端粒陰性對照管里,。

26.分別加入××微升猴端粒長度檢測內(nèi)參引物液到標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參管、待測樣品內(nèi)參管和內(nèi)參陰性對照管里,。

27.分別加入××微升猴端粒長度檢測染色液到所有管里,。

28.分別加入××微升猴端粒長度檢測補充液到所有管里。

29.放進 4℃微型臺式離心機瞬時離心 5 秒,。

30.使用××微升槍頭分別加入 1 滴猴端粒長度檢測封隔液到所有管里,。

31.即刻放進熒光定量PCR 儀。

32.熒光定量PCR 反應(yīng)程序為,。

溫度（℃）時間循環(huán)

955 分鐘1

95

60

7230 秒

30 秒

30 秒

40

33.進行數(shù)據(jù)分析

（1）采集數(shù)據(jù),，進行擴增曲線分析。（退火溫度進行熒光信號采集）

（2）獲得所有樣品的 Ct 值,。

（3）分別構(gòu)建端粒長度和基因組拷貝數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為 Ct 值,；橫座標(biāo)（X 軸）。為對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)端粒長度（Kb）或?qū)?shù)標(biāo)準(zhǔn)基因組拷貝數(shù),。

（4）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)端粒長度（Kb）或基因組拷貝數(shù),。

（5）計算樣品實際端粒長度（Kb）/基因組：

實際總端粒長度（Kb）/基因組=樣品總端粒長度（Kb）÷樣品基因組拷貝數(shù)

選擇我們的猴端粒長度檢測試劑盒(染料法 qPCR)，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航,！