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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是用于多重?zé)晒馓结槞z測(cè)的即用型 qPCR 試劑,，可以同時(shí)對(duì)多個(gè)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 分析（Quantitative PCR, qPCR）,。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分,、熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶,、dNTPs,、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有 qPCR 所需要的成分,，用戶只需加入基因組 DNA 或 cDNA 模板,、引物和探針即可進(jìn)行探針法 qPCR 反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.以 2×Mix 提供,，用戶只需準(zhǔn)備模板,、引物、探針和 ROX 染料（取決于 qPCR 儀器）即可以進(jìn)行探針法 qPCR 實(shí)驗(yàn),，非常方便快捷,，降低了操作誤差。

2.各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,，反應(yīng)的靈敏度高,、特異性強(qiáng)。靈敏度最高時(shí)可  以達(dá)到 50 拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量,，引物設(shè)計(jì)等相關(guān)）,。

3.既可用于 TaqMan 探針 qPCR，也可用于分子信標(biāo)探針 qPCR,。

4.靈敏度和專一性比染料法 qPCR 更高,。

5.UNG 防污染檢測(cè)系統(tǒng)：添加 UNG（Uracil N-Glycosylase），可以有效防止因 PCR產(chǎn)物污染造成的假陽(yáng)性結(jié)果,。

6.可用于基因表達(dá)分析,、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實(shí)驗(yàn),。也可以用于定性檢測(cè),。

7.本產(chǎn)品反復(fù)凍融 20 次對(duì)擴(kuò)增效果沒有任何影響。

8.本產(chǎn)品足夠 100 次 20 μL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。

9.2×多重探針法qPCR MasterMix（含 UNG 酶）只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

2×Multiplex Probe

qPCR MasterMix（with UNG）1 mL1.5 mL 本色蓋

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,，-20℃保存, 不凍融時(shí)保存期限為 24 個(gè)月。如果需要每天使用,，可在 4℃放置三周,。

自備試劑

DNA 模板、引物,、超純水,。

使用方法：

1. 如果有 N 個(gè)樣品并且做定量分析，最好設(shè)置 N+7 個(gè)反應(yīng),，多出的 7 個(gè)中,，6 個(gè)是做標(biāo)準(zhǔn)曲線的陽(yáng)性對(duì)照，一個(gè)是陰性對(duì)照（NC）,。在 N+7 個(gè) PCR 管中,，加入下列成分。如果是做定性分析,，則 6 個(gè)做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品縮減成一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（PC）,，用

戶自己需要根據(jù)下表進(jìn)行適當(dāng)修改（把 6 個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)改成 1 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)）。

成分N 個(gè)樣品管6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)

曲線管NC 管

2×多重探針法各 10 μL各 10 μL10 μL

qPCR MasterMix

自備引物 1（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備引物 2（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備模板 DNA

基因組 DNA10-100 ng不加不加

或 cDNA1-10 ng不加不加

自備陽(yáng)性對(duì)照模板（6 個(gè)梯度）不加各 1 μL（各

加 1 個(gè)梯度）不加

陰性對(duì)照模板（一般用水）不加不加1 μL

自備探針（0.5 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備 50×自備

ROX I 或 ROX II 染料（見注）各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL

補(bǔ)超純水到20 μL20 μL20 μL

2.放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考,，一定需要根據(jù)靶分子長(zhǎng)度,， 引物和探針的 Tm 值、標(biāo)記染料的種類等進(jìn)行調(diào)節(jié),。一般選擇三步法 PCR：

如果引物 Tm 值接近 60℃,，也可以選擇兩步法 PCR：

3.數(shù)據(jù)處理

如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸,， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,， 再推算出其濃度,。

如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性,。一般情況下,，陰性對(duì)照 Ct 大于

或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品,，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性,。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次,。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,，如果小于 40，則為陽(yáng)性,。

附：

下列信息僅供參考,，具體以 qPCR 儀器的使用手冊(cè)為準(zhǔn)。

1.不需要 ROX 的機(jī)型：Agilent MX3000 和 MX4000,、iCycler IQ,、LightCycler 480、 Smart Cycler System,、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號(hào)的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料,，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè) qPCR 分析。

2.需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000,、7300,、7700、7900HT,、Step One,、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的機(jī)型： ABI Prism7500 ,、7500 Fast ,、MJ Opticon,、MJ

Chromo4,、Corbett RotorGene 3000。

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