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產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是在探針法 qPCR MasterMix 基礎(chǔ)上改進的產(chǎn)品,，可以直接用唾液為模板進行 PCR 擴增，不需要任何 DNA 純化過程,。

產(chǎn)品特點：

1.以 2×Mix 提供,，用戶只需準備模板、引物和探針即可以進行探針法實時定量 PCR,。

2.直接以唾液為模板,，不需要任何 DNA 純化和釋放過程。

3.唾液用量可高達到總反應(yīng)體積的 35%,，20uL 體系可以用 7uL 唾液,，避免了漏檢。

4.靈敏度高,，可以檢測 10 拷貝的 DNA/反應(yīng),。

5.提供足夠 8 次的陽性對照引物、探針和模板,。

6.可用于基因表達分析,、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實驗,。也可以用于定性檢測,。

7.本產(chǎn)品反復(fù)凍融 20 次對擴增效果沒有任何影響。

8.本產(chǎn)品足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng),。

9.2×唾液直擴探針法 qPCR MasterMix只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

2×唾液直擴探針法 qPCR

MasterMix1 mL1.5mL 紅色蓋

人基因組 DNA 溶液

（10E4 拷貝/uL）50uL0.5mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存,，有效期一年,。

自備試劑

唾液、自備引物,、超純水,。

使用方法：

下列操作以定性實驗為例

1. 如果有 N 個樣品，則設(shè)置 N+2 個反應(yīng),，多出的一個是擴增陰性對照（NC）,，一個是擴增陽性對照（PC）?？梢允褂么_認能被所用引物和探針擴增并檢測的 DNA 作為陽性對照,。本試劑盒提供少量人基因組 DNA 溶液為陽性對照,。在 N+2 個 PCR 管中按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

成分N 個樣品管NC 管PC 管

2×唾液直擴探針法 qPCR

MagicMix各 10 uL10 uL10 uL

自備引物對（10uM each）各 2 uL2 uL2 uL

自備探針（5uM）各 1 uL1 uL1 uL

N 個唾液樣本各 1-7 uL--

人基因組 DNA 溶液--7 uL

補自備超純水均到 20 uL到 20 uL到 20 uL

2.放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數(shù)僅供參考。具體需要以使用的引物探針 Tm 和靶分子長度進行調(diào)節(jié),。一般選擇三步法 PCR：

如果引物 Tm 值接近 60℃,，也可以選擇兩步法 PCR：

3.數(shù)據(jù)處理

一般情況下，陰性對照 Ct 大于或等于 40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30,。對待測樣品,，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性,。如果在 35-40 之間,，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,，如果小于 40,，則為陽性。本試劑盒提供的陽性對照,。

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