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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

真核生物 mRNA 5’端的帽結(jié)構(gòu)為mRNA 的穩(wěn)定,、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯所需，但體外轉(zhuǎn)錄制備得到的 RNA 并沒(méi)有帽結(jié)構(gòu),。為了提高這些 RNA 在體外翻譯,、轉(zhuǎn)染和微注射應(yīng)用的穩(wěn)定性，很有必要為其加上 Cap0 帽結(jié)構(gòu)（m7GpppN 帽結(jié)構(gòu)或m7G 帽結(jié)構(gòu)）,。雖然 Cap0 RNA 可以細(xì)胞內(nèi)被有效的翻譯成蛋白質(zhì),，但在體內(nèi)

（而不是細(xì)胞內(nèi)）使用時(shí)會(huì)引起免疫反應(yīng)，而 Cap1 RNA 可以逃逸免疫反應(yīng),。因此很多時(shí)候需要制備 Cap1 RNA,。Cap1 帽結(jié)構(gòu)由 Cap0 帽結(jié)構(gòu)甲基化而得。本產(chǎn)品是專(zhuān)門(mén)用于為無(wú)帽RNA 分子加上Cap1 帽結(jié)構(gòu)的試劑盒,。此加帽過(guò)程由RNA triphosphatase, guanylyltransferase,、guanine methyltransferase、 m7GpppN 甲基化酶四個(gè)酶催化的連貫反應(yīng)組成,，其示意圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用,，用戶(hù)只需提供無(wú)帽 RNA 即可。

2.加帽效率高,，接近 9%,。

3.本試劑盒足夠 40 次 20μL 體系的無(wú)帽 RNA 加 Cap0-Cap1 帽反應(yīng)，每次可以處理多達(dá) 10μg 的無(wú)帽RNA,。

4.本試劑盒也可以用于無(wú)帽RNA 加 Cap0,，只是在設(shè)置反應(yīng)時(shí)不加 RNA Cap0

甲基化酶。

5.所得 Cap1 RNA 經(jīng)過(guò)純化后可以直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。也可以不經(jīng)過(guò)純化用于

polyA 加尾反應(yīng),。

6. RNA 加 Cap0 和 Cap1 試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份 規(guī)格包裝

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 A 80 μL0.5mL 綠蓋管

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 B 40 μL0.5mL 黃蓋管

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 C 40 μL0.5mL 藍(lán)蓋管

RNA 加 Cap0 酶,，10U/μL 40 μL0.5mL 紅蓋管

RNA Cap0 甲基化酶,，50U/μL 40 μL0.5mL 紅蓋管

使用手冊(cè) 1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,、有效期一年。

自備試劑

超純水,、體外轉(zhuǎn)錄試劑盒,，RNA 純化試劑盒

使用方法：

一、體外轉(zhuǎn)錄制備 RNA 模板（本試劑盒不含所需試劑）

1.用自備的體外轉(zhuǎn)錄劑盒制備 RNA 模板,。

2.純化 RNA 并測(cè)定其濃度,。純化的 RNA 需要溶解在 RNase-free 水中。二,、加帽反應(yīng)

3.在一個(gè)RNase-free 離心管中,，加入10μg 的純化的無(wú)帽RNA,，補(bǔ)RNase-free水到 14μL。

4.65℃變性 10 分鐘后,，放冰上待用,。變性能打開(kāi)可能空間阻礙酶接觸 RNA 末端的二級(jí)結(jié)構(gòu)，非常重要,。如果加帽效果不好,，還可以提高溫度到 75℃和85℃變性 10 分鐘。

5.再在另外一個(gè) RNase-free 離心管中加入下列成分：

成分加入量

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 A2 μL

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 B1 μL

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 C1 μL

RNA 加 Cap0 酶,，10U/μL1 μL

RNA Cap0 甲基化酶,，40U/μL1 μL

6.最后將冰上放置的 14μL 無(wú)帽 RNA 加入并輕柔吹打混勻。

7.37℃保溫 2 小時(shí),。

8.  得到的 Cap1 RNA 可以不經(jīng)過(guò)純化直接用于 polyA 加尾,。也可以純化后用于各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果在設(shè)置反應(yīng)時(shí)不加 RNA Cap0 甲基化酶,，則得到的RNA 是 Cap0 RNA,。

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