目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 平末端克隆試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20次 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-1873 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Blunt-Ended Cloning Kit |
| 保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產(chǎn)品簡介：
用Pfu DNA聚合酶等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物為平末端，直接克隆比較困難,。本試劑盒提供了含克隆載體的平末端DNA片段克隆試劑,，極大提高了其克隆效率。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.基于T4 DNA連接酶的平末端克隆,。
2.優(yōu)化的連接體系,，極大降低載體自連。
3.使用藍(lán)白斑篩選,，一般95%以上的白轉(zhuǎn)化子都是帶有DNA插入片段的重組子,。
4.可用于克隆高保真DNA聚合酶如Pfu、Pwo,、DeepVent等DNA聚合酶擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物,；也可以用于克隆一些產(chǎn)生平末端的限制性內(nèi)切酶如EcoRV和SmaI等酶酶切產(chǎn)生的DNA片段,；還可用于克隆由粘端DNA用DNA聚合酶補(bǔ)平 后的得到的平末端DNA片段。
5.本產(chǎn)品足夠20次的10?L體系的平末端克隆,。
6.平末端克隆試劑盒只可用于科研,。
產(chǎn)品參數(shù)：
成份規(guī)格包裝
超純水1 mL1.5 mL 藍(lán)蓋管
平末端克隆 B 載體20 次0.5 mL 黃蓋管
10×平末端克隆緩沖液20 ?L0.5 mL 綠蓋管
T4 DNA 連接酶，5U/ ?L
20 ?L0.5 mL 紅蓋管
使用手冊1 份無
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期一年。
自備試劑
平末端 DNA 片段,、大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,。
使用方法：
1. 按下表設(shè)置連接反應(yīng)體系。注意：首-次使用本產(chǎn)品時(shí)需要在平末端克隆 B 載體干粉管中加入 22 ?L 的超純水,，渦旋震蕩 30 秒溶解,，短暫離心后即可使用。沒有用完的平末端克隆B 載體溶液需要放-20℃保存：
成份用量
純化后的平末端 DNA 片段10 ng
10×平末端克隆緩沖液1 ?L
平末端克隆 B 載體溶液1 ?L
T4 DNA 連接酶,，5U/ ?L
1 ?L
補(bǔ)超純水到10 ?L
2. 37℃保溫,，60 分鐘。
3. 連接產(chǎn)物可直接用于后續(xù)轉(zhuǎn)化自備的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,，37℃過夜培養(yǎng),。注意：本產(chǎn)品使用的 B 載體是 Amp 抗性，故需要涂盤在含 Amp 的LB 培養(yǎng)基上篩選重組子,，同時(shí)還需要在 LB 培養(yǎng)基中加入終濃度是 40 ?g/m 的 LX-gal 和終濃度是 24 ?g/mL 的 IPTG,，這樣可以通過藍(lán)白斑篩選來降低假陽性率到 5%以下。白斑是重組子,，藍(lán)斑是非重組子,。
選擇我們的平末端克隆試劑盒，就是選擇精準(zhǔn),、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！
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